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【求助】请教IgG的SDS-PAGE电泳问题。
用还原性SDS-PAGE电泳检测IgG抗体和血清，分离胶浓度为12.5%，浓缩胶浓度为4.5%；跑浓缩胶80V电压45分钟，分离胶110V跑60分钟；marker为11K到117K，结果如图所示。【求助】请教IgG的SDS-PAGE电泳问题。
从图中可以看出，轻链的位置应该没错，但是重链区域的条带太多。
我的问题是：
1，重链区域为什么会有那么多的条带呢？是不是有可能在IgG溶液中加入了BSA所致呢？
2，那些条带中，哪条是重链呢？
3，怎么解决出现这么多条带的问题呢？
还望大家不吝赐教，谢谢。
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最新回复
yychen (2013-6-20 17:02:39)
1、检查胶浓度的配方。你这个胶看起来要大于12.5%。
2、检查抗体的样品溶液体系。好像有有机溶剂成分。
3、减少血清上样量为现在的10%。加大抗体上样量。
4、我们常用的电泳程序为：
100-120V电压至样品完全进入分离胶（大约20分钟），
分离胶160-200V至溴酚蓝前沿刚出胶底端（大约35分钟）。
5、Marker条带模糊，可能电泳缓冲液不对，还新配的试试。
bohe221 (2013-6-20 17:02:58)
非常感谢楼上这位版主的帮助。
1，我的胶是按照药典上12.5%浓度配的，但是所用分离胶缓冲液ph为8.6，浓缩胶缓冲液ph为6.6，不知道这会不会有影响呢？
2，你说抗体的样品溶液体系，是指我的原始抗体还是上样缓冲液呢？
3，血清的上样量应该是要降低不少。我抗体的用量为：10ug/孔呢，而第一孔更高，达到50ug/孔。
4，我担心这么高的电压下，那些分子量比较接近的分子能区分开嘛？
5，我的电泳缓冲液ph为8.29，这会有影响嘛？
再次谢谢！
ffooll (2013-6-20 17:03:17)
给你看一张IgG的电泳图。
5%浓缩胶，12%分离胶。电泳程序如上我所讲。
Marker为97、62、43、31、21、14kd。其中14kd条带已进入到前沿中。
ffooll (2013-6-20 17:07:16)
ffooll (2013-6-20 17:07:38)
1，我的胶是按照药典上12.5%浓度配的，但是所用分离胶缓冲液ph为8.6，浓缩胶缓冲液ph为6.6，不知道这会不会有影响呢？
2，你说抗体的样品溶液体系，是指我的原始抗体还是上样缓冲液呢？
3，血清的上样量应该是要降低不少。我抗体的用量为：10ug/孔呢，而第一孔更高，达到50ug/孔。
4，我担心这么高的电压下，那些分子量比较接近的分子能区分开嘛？
5，我的电泳缓冲液ph为8.29，这会有影响嘛？
再次谢谢！
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1、抗体的样品溶液体系，是指原始抗体的缓冲体系。
2、可能是你的蛋白浓度测定有问题。我的图中IgG上样量第二孔大约为15ug/孔。
3、电泳的分辨率与电压的高低没有多大关系。控制电压主要是为了防止电流过大而过热、烧胶。
4、我只是从你的电泳图表现判断，可能你的电泳缓冲液有问题。不是pH的话，可能是其它组分有变化。
qhyu (2013-6-20 17:08:40)
我们这里没有灌制梯度胶的工具，我是用的15%的胶
我的问题是我的marker有好几条是斜的，不知道怎么回事，
owanaka (2013-6-20 17:09:04)
【求助】请教IgG的SDS-PAGE电泳问题。