最新更新主题

【求助】求教一项关于酶活性测定的问题

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-6-26 17:10    作者: jiushikeshui371    来源: 分析测试百科网

查看完整版本请点击这里：
【求助】求教一项关于酶活性测定的问题
我想观察IL-6对于支链α酮酸脱氢酶活性的影响，想一下关于支链α酮酸脱氢酶活性的测定方法是什么啊
查看完整版本请点击这里：
【求助】求教一项关于酶活性测定的问题

我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • loli (2013-6-26 17:10:35)


    这个反应质子受体可以是FAD也可以是NAD+, 后者可以测340nm的吸收峰变化测活

  • jiushikeshui371 (2013-6-26 17:10:58)

    QUOTE:

    原帖由 loli 于 2013-6-26 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    这个反应质子受体可以是FAD也可以是NAD+, 后者可以测340nm的吸收峰变化测活
    我以前没做过这方面的，再请教一下，把这个酶从肌细胞中纯化出来，然后用分光光度计测那个吸收峰变化，来判断其活性，是这样吗?

  • loli (2013-6-26 17:15:15)

    QUOTE:

    原帖由 jiushikeshui371 于 2013-6-26 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')


    我以前没做过这方面的，再请教一下，把这个酶从肌细胞中纯化出来，然后用分光光度计测那个吸收峰变化，来判断其活性，是这样吗?
    组织提取的酶恐怕必须用特定底物然后做色谱分析了，因为这个酶结构比较复杂，提纯后很难还有活性。组织匀浆之后成分太复杂也无法用简单方法测活。

    最新的一些文献：
    cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15669679')
    cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20018161')

  • jiushikeshui371 (2013-6-26 17:15:55)

    QUOTE:

    原帖由 loli 于 2013-6-26 17:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')


    组织提取的酶恐怕必须用特定底物然后做色谱分析了，因为这个酶结构比较复杂，提纯后很难还有活性。组织匀浆之后成分太复杂也无法用简单方法测活。

    最新的一些文献：
    cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15669679')
    http: ...
    多谢多谢，就是说如果我测此酶血清中的活性，可以用分光光度计法，要是测肝脏、骨骼肌里的需要用色谱分析。
    我还想问一下，支链氨基酸主要是在肌细胞进行代谢，那么支链酮酸脱氢酶主要是分布在什么细胞里呢，我要是做离体实验的话，应该培养什么细胞呢

  • loli (2013-6-26 17:16:28)

    QUOTE:

    原帖由 jiushikeshui371 于 2013-6-26 17:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')


    多谢多谢，就是说如果我测此酶血清中的活性，可以用分光光度计法，要是测肝脏、骨骼肌里的需要用色谱分析。
    我还想问一下，支链氨基酸主要是在肌细胞进行代谢，那么支链酮酸脱氢酶主要是分布在什么细胞里呢，我要是做离体实验 ...
    http://biogps.org/#goto=genereport&id=593

    主要是肝和心肌，建议取肝脏线粒体提纯。养细胞的话HepG2这些常用的肝上皮细胞系应该都可以。

    参考文献：cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3593587')

  • jiushikeshui371 (2013-6-26 17:17:19)

    cuturl('http://biogps.org/#goto=genereport&id=593')

    主要是肝和心肌，建议取肝脏线粒体提纯。养细胞的话HepG2这些常用的肝上皮细胞系应该都可以。

    参考文献：cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3593587')

    ======================================================================================

    想再请教您个问题，在试验设计中，我想阻断酶的作用，请教一下这个酶有没有抑制剂啊，我没查到相关文献，多谢

  • loli (2013-6-26 17:17:49)

    QUOTE:

    原帖由 jiushikeshui371 于 2013-6-26 17:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    cuturl('http://biogps.org/#goto=genereport&id=593')

    主要是肝和心肌，建议取肝脏线粒体提纯。养细胞的话HepG2这些常用的肝上皮细胞系应该都可以。

    参考文献：cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3593587')

    ================= ...
    根赤壳霉素可以阻断活性

    参考文献: cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12130680')

  • jiushikeshui371 (2013-6-26 17:18:16)

    QUOTE:

    原帖由 loli 于 2013-6-26 17:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')


    根赤壳霉素可以阻断活性

    参考文献: cuturl('http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12130680')
    根赤壳霉素阻断的是支链α酮酸脱氢酶激酶的活性，而支链α酮酸脱氢酶激酶可以使支链α酮酸脱氢酶的E1磷酸化，使支链α酮酸脱氢酶失活，阻断激酶的话，会使支链α酮酸脱氢酶的活性增加的吧？
查看全部回复 我也来说两句
查看完整回复请点击这里：
【求助】求教一项关于酶活性测定的问题