【求助】做western跑胶上样,什么叫定量,半定量?

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-6-26 17:22 作者: xiaoxiaoniao 来源: 分析测试百科网

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【求助】做western跑胶上样,什么叫定量,半定量?

本人是新手,刚做western有许多问题要请教大家:
关于上样时定量和半定量有什么区别?定量后免疫印迹后曝光后的条带怎样定量强弱?谢谢大家!

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u234 (2013-6-26 17:23:14)

我已经跑了两年多的western了，但从没听过上样时有定量和半定量之说，一般都说某种实验方法是定量的还是半定量的，严格的说，western的结果只能算是半定量的，至于暴光后条带怎样定量强弱，它首先要被扫描到计算机中，然后通过特殊软件就可以做分析了。
standbyme (2013-6-26 17:23:39)

楼上说的对，上样没有定量和半定量的说法。我们在上样之前进行先进行定量，其实这也只是一个相对的定量，不能代表样品立蛋白的真实含量。
INK (2013-6-26 17:24:00)

请教上一楼一个问题：如果上样前定量并不能代表样品蛋白的真实含量，那这个定量是不是没有意义了呢？

一直没有搞懂这个问题，诚心请教。
kuaizige (2013-6-26 17:24:26)

楼主的意思我不太明白, 但关键是要加一个内参对照(B－actin )!就像做PCR一样! 不知是否理解错了?
xiaoxiaoniao (2013-6-26 17:24:48)

上样前定量是为保证各样品之间总蛋白量一致，从而检测目标蛋白在各样品中的变化。由于western本身会受到多种因素的影响，并不是很精确，所以看目标蛋白的量的变化，只能看个大体趋势，也就是所谓的半定量。同时，还可以检测一些内参蛋白（不受你的实验处理影响的蛋白）如tubulin或B－actin ,以显示你的各样品上样量一致，说明你的目标蛋白的量的变化不是由于上样量不一致引起的，而确实是由于对各样品的处理不同引起的。
DDD (2013-6-26 17:25:10)

western是不需要内参的，因为那样统计起来没有好的统计方法，再说内参的出片是个问题！我的经验，这是国家重点实验室的经验呀！有什么不明白可以联系呀！
langlang (2013-6-26 17:25:50)

我现在正在准备做WESTERN，有的人说要用内参，有的人说不用。到底是怎么回事呢？可以给我解释一下吗？谢谢！
ero11 (2013-6-26 17:26:13)

1.可以事先计算蛋白浓度,20-30UG/次/WELL.2.但是仍要做ACTIN确保你上的样量相同.3.如果你只要定性即有或无,就没比要顶量.否则,至少要做3次一上(包括ACTIN). 才能顶量.ACTIN 是必需的.否则PAPER 不接受.