【求助】sds-paeg电泳为什么要4℃环境下跑

最新回复

• u234 (2013-7-03 15:36:32)

  SDS-PAGE没有硅胶，是聚丙烯酰胺。所说的4度他其实是想说恒定的温度吧。其实没有这个必要，如果你用的电流不是非常高（不过比如双板同时跑的时候分离胶时的电流可能达到80mA左右，这个就不行）只要通冷凝水就可以了。

• bamboo16 (2013-7-03 15:36:51)

  
  确实如此，如果不是做一些小分子量或者磷酸化等较难做的蛋白，一般跑电泳也没有必要一定要保持4℃进行。
  我的课题实验从12kD做到130KD的多个指标，大多数时候都没有用4摄氏度。
  当然了，有的教程也提到4度电泳，既然你老板说了这个，那就遵照来做，尤其是难以出结果的时候。

• qumm1985 (2013-7-03 15:37:11)

  
  其实一般常温就可以跑电泳了，如果你发现的电泳槽的盖子上出现了似蒸汽的现象的话，你就用4度，或者冰浴都可以。
  祝好！

• tuuu2 (2013-7-03 15:37:35)

  
  电泳过程，如果电极缓冲液缓冲使用时间过长，有效电荷减少，电泳的过程会产生大量的热能，热能会影响电泳物质的的移动，如果使用新鲜的电极缓冲液应该不会产生太多热量就不用担心电泳物质因加热作用产生的扩散

• 箭头儿 (2013-7-03 15:37:56)

  
  sds-page电泳时，体系会产热，这会导致蛋白质降解，跑出的胶效果不是很好，特别是在夏天。所以要给体系降温，但并不是指严格的4度电泳。那么常用的处理方法就是：1、把电泳槽直接放4度冰箱里；2、在电泳槽内放置冰袋；3、取大盆，制作冰水混合物，然后将电泳槽放于冰水混合物内，是冰水混合物液面略高于电泳液液面。
  如果是气温较低，或者实验要求不是很高。那么就没必要4度电泳。

• ending (2013-7-03 15:38:25)

  
  针对一些热稳定性差的蛋白

• duoduo (2013-7-03 15:39:23)

  
  电泳一般是在常温跑，如果是跑复合物或者稳定性差的蛋白最好是低温，另外跑胶时间若较长也容易弥散和降解

• avi317 (2013-7-03 15:39:44)

  
  找个塑料的盆，加了水，把电泳槽坐在里面，周围再放一圈冰袋就OK了
  此方法也适用与WB转印。

• zhenxin (2013-7-03 15:40:08)

  非常感谢友人们的回复，试用4℃跑了下，效果没有明显的变化。不过能跑出目的蛋白就好了~~~