【求助】包涵体用尿素溶解后可直接用GST beads纯化吗

最新回复

• ritou1985 (2013-7-10 17:51:44)

  QUOTE:

  原帖由 zwsyrt 于 2013-7-10 17:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我用BL21表达GST融合蛋白，形成了包涵体，可用8M尿素溶解，但请问溶解后可直接用GST beads结合纯化吗？

  不可以

• u234 (2013-7-10 17:52:09)

  那先应该怎样处理啊

• avi317 (2013-7-10 17:52:29)

  可以先做蛋白复性，然后再过柱，但是复性成功率很低；也可以摸索表达条件，比如说表达温度、IPTG浓度，但是据经验都是隔靴搔痒；比较有效的方法是重新克隆、换载体，如果条件允许换成HIS标签的，即使是包涵体表达也可以过镍柱纯化。

• one (2013-7-10 17:52:57)

  
  打个最简单的比方，两斤毛线织成毛衣后，可以穿在身上，有领有袖，可以搪风，那么直接把两斤毛线挂在身上会是什么效果呢？呵呵。
  
  GST融合蛋白被 8M 尿素 处理后，已处于变性状态，GST（谷胱甘肽转移酶，毛衣） 空间结构被严重破坏，成了一段多肽链 (2斤毛线)，已经失去了与 glutathione 结合的能力。
  
  如果想挂柱，有两个方法：
  
  1 蛋白质复性。
  2 改变表达条件，使之形成可溶性表达。（买件新毛衣）

• zwsyrt (2013-7-10 17:53:16)

  
  那么请问可以用SDS溶解后直接用GST beads结合纯化吗？
  还有，我的蛋白是用来制多抗的。

• caihong (2013-7-10 17:54:02)

  
  在得到具备正确折叠的三级结构的 GST 之前，不要再考虑GST亲和层析挂柱。
  
  SDS 也不能使包涵体内的蛋白质正确折叠。

• caihong (2013-7-10 17:54:18)

  
  在得到具备正确折叠的三级结构的 GST 之前，不要再考虑GST亲和层析挂柱。
  
  SDS 也不能使包涵体内的蛋白质正确折叠。

• IAM007 (2013-7-10 17:54:54)

  同意楼上的，制备多抗的话包涵体就可以，园子里关于包涵体制备多抗很多人问过，搜搜看。

• bring (2013-7-10 17:55:14)

  
  如果加上GST还是不溶的话可以换His标签，加尿素之后直接过镍柱然后复性就好了

• yangzhicong (2014-3-03 16:38:59)

  你好
  我最近也做GST标签蛋白包涵体纯化
  可以留个你的联系方式吗？？
  我想向你请教一些GST标签蛋白包涵体纯化
  谢谢