【求助】溶菌酶破碎细菌

最新回复

• wood533 (2013-7-19 15:08:21)

  溶菌酶溶液是不是放-20了
  放4度就ok了

• yueban-1147 (2013-7-19 15:08:50)

  
  应该不能吧，怎么知道不能破菌了，应该是你的蛋白不表达了吧

• zhihui小新 (2013-7-19 15:10:17)

  
  没有啊，就在4度放的，并且每次都是现用现配，蛋白肯定表达了，因为我都电泳鉴定过了，以前都能裂解出DNA,也不是我的蛋白不可溶 ，现在裂解上清也有蛋白，可是效果不好，跑电泳的时候看到的全部条带都很浅。

• ending (2013-7-19 15:10:52)

  
  超声的因素吧，是不是超声的功率或者时间的问题呢

• zhihui小新 (2013-7-19 15:13:37)

  
  以前裂解的时候溶菌酶就能把蛋白裂解出来啊，能把DNA都释放出来，不需要超声，超声怕控制不好对蛋白活性有影响。我纯化的是一个酶。

• 3N4G (2013-7-19 15:14:32)

  
  建议结合反复冻融法。

• 66+77 (2013-7-19 15:15:39)

  
  你的pH是多少？

• zhihui小新 (2013-7-19 15:17:32)

  
  溶菌酶配制的时候是ph8.0配制的，在ph7.9的环境中工作

• BUK (2013-7-19 15:19:10)

  
  不知道你是怎么确定溶菌酶是不好用的。个人经验，用溶菌酶裂解细胞后（冰浴30m），菌液会变得非常粘稠，这样就认为效果可以了（DNA等一些杂物质释放出来了）。溶菌酶处理后最好再超声一下，超声后菌液不粘稠即可，没必要非常澄清。下一步即可从上清中纯化蛋白了。仅供参考。

• ero11 (2013-7-19 15:19:37)

  
  你的溶液中是不是加了影响酶活性的物质，详细比较一下两次成分有没有差异，一定要仔细查找，比对试验记录。

• zhihui小新 (2013-7-19 15:22:11)

  恩，就是根据踏；裂解之后变粘稠判断的，现在加入溶菌酶之后菌液一点都没变化，冰浴三十分钟，菌液自己就沉淀了，以前都是
  
  DNA能出来，溶液很粘稠的

• IAM007 (2013-7-19 15:24:11)

  
  请问楼主最终是怎么解决的？我也碰到了同样地问题，前一阵都很好，现在连细胞都破不开，急 谢谢啦！

• mamamiya (2013-7-19 15:30:02)

  
  溶菌酶不是应该在4-6.5的PH范围之内作用吗？

• zhihui小新 (2013-7-19 15:30:27)

  
  发现问题了，不同的细菌对溶菌酶的敏感性不一样