【讨论帖】摸转膜时间是个很费时间的事情

最新回复

• leifengta (2013-7-22 13:29:21)

  
  湿转
  
  histone and HP1 10-30kD 90min 200mA
  
  gst-set8 50-100kD 120min 200mA

• leifengta (2013-7-22 13:29:49)

  GAPDH 分子量 40左右，200ma，2h

• leifengta (2013-7-22 13:30:20)

  我发现 大家都可以用到 200ma ，
  b-actin 43kd 100ma 1h

• ritou1985 (2013-7-22 13:30:47)

  
  主要是湿转和半干转条件本身就不同吧。大家应该注明自己是湿转还是半干转这样才有参考价值。
  湿转， 40kd 200mA 1h45'or 180mA 3h
  110kd 200mA 2h30'

• luoliqiong (2013-7-22 13:31:51)

  260KD，300mA 2h

• is2011 (2013-7-22 13:32:11)

  
  1、湿转（恒压）：时间是90min，电压根据胶的厚度调整，具体为0.75mm—80V,1mm—90V，1.5mm—100V；
  2、半干转（恒流）：时间30min，电流根据有效转膜面积调整，即电流=2.5mA*有效转膜面积，计算后所得的值稍微减去一些：减去0-5mA（面积小的话就少减一些，面积大的话就多减去一些）
  本人所用的是BIO-RAD的仪器，做的分子量范围12-170，在同一块10%的胶上同时转过20和130的分子，6%-15%的胶转膜效率也均较高

• mickeylin (2013-7-22 13:32:33)

  17kd-170kd, iBlot Dry Blotting system, invitrogen, 8-10min

• huifeng0516 (2013-7-22 13:33:27)

  
  50KD左右
  250mA 1h

• mod=8048 (2013-7-22 13:34:04)

  
  湿转
  27Kda-110Kda
  100V,60min.

• windy+++ (2013-7-22 13:34:29)

  
  楼主的提议太棒了.
  
  我希望知道120KD的湿转条件！！谢谢
  
  我分享一下自己的实验体会：40-70KD 40v 3h
  
  转得很好

• star#room (2013-7-22 13:34:54)

  
  半干转 伯乐
  110kd 25v 30分钟

• babybabe (2013-7-22 13:35:21)

  
  湿转 Biorad
  40-120 KD
  300V,1h

• gmjghh (2013-7-22 13:35:52)

  本人所用的是BIO-RAD的仪器，湿转。做的分子量范围32-170，在同一块10%的胶上同时转过32、42、100、160kDa的分子，转膜时间是4小时，有时候转两个小时100的也很亮。有时候虽然做出的条带很亮，但是考马思亮蓝染胶后 仍然可以看到目的条带，有时候还相当清楚，所以我有个疑问，这样做出来的图片可靠吗？！

• gmjghh (2013-7-22 13:36:39)

  忘了说条件了。0.35A,恒流转的

• gemei0115 (2013-7-22 13:37:14)

  GAPDH 湿转 100V 2h

• wsll (2013-7-22 13:37:53)

  大家能否 给我个建议，关于转分子量54，140KD湿转恒压的条件。谢了！

• 3648755 (2013-7-22 13:38:16)

  
  我用bio-rad mini型，50左右的很好转，380ma 35min，但是19-26的用这个条件不稳定，同样的条件有时候做不出来，求教原因

• zwsyrt (2013-7-22 13:38:58)

  
  湿转，200mA，1h30min,0.45um的PVDF膜，大小蛋白通吃（十几kd的也很好），或100V，1h，一样，注意尽量低温转膜。另外看到楼上有说转膜后考染还是有条带，那也很正常，不可能一点不剩吧，结果当然可信的

• hyuu (2013-7-22 13:39:19)

  
  湿转 36kd 250ma 90min

• mamamiya (2013-7-22 13:39:40)

  
  同时转100kd左右的和actin,还有20-30kd的蛋白，半干转15v30min.
  结果是marker红线以上的透到滤纸上了，下面小分子量的还好。