【求助】酵母质粒提取

最新回复

• glass (2013-7-22 13:49:18)

  
  在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。

• vvmmoy (2013-7-22 13:49:44)

  QUOTE:

  原帖由 glass 于 2013-7-22 13:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。 ...

  
  酵母质粒DNA不会吸附于玻璃珠上吗？

• glass (2013-7-22 13:50:04)

  
  呵呵，就是酵母质粒DNA吸附于玻璃珠上，经过处理后再洗脱下酵母质粒DNA。

• DDD (2013-7-22 13:50:38)

  玻璃珠SIGMA有，可以问问代理。
  
  也可以使用蜗牛酶裂解法破酵母细胞壁法。

• vvmmoy (2013-7-22 13:50:59)

  
  能给我具体说说蜗牛酶裂解法的步骤吗？谢谢。另外你知道玻璃珠的作用吗？它应该是吸附酵母染色体DNA吧，而不是质粒DNA。你用过没有，它贵不贵，因为我们老板比较小气，所以在买药品方面比较慎重。在用玻璃珠的那种方法中，其它药品都齐了，就差玻璃珠了。谢谢！

• vvmmoy (2013-7-22 13:51:17)

  呵呵，就是酵母质粒DNA吸附于玻璃珠上，经过处理后再洗脱下酵母质粒DNA。
  
  ===========================================================================================================
  
  应该是酵母染色体DNA吸附于玻璃珠上吧，因为在这种方法中，根本就没有用TE洗玻璃珠，只是用的上清液，而在提取酵母核DNA的时候就要洗玻璃珠。所以我猜想是酵母染色体DNA吸附于玻璃珠上，你说对吗？希望能给我回答，谢谢！你就用的这种方法提取酵母质粒吧，玻璃珠贵吗?

• am10 (2013-7-22 13:51:39)

  
  告诉你一种简便实用的提取酵母质粒的方法，其纯度完全可以用来测序和做PCR。你可以尝试一下。
  氯化苄提取真菌基因组的方法。在1.5ml Appendorf管中加入0.1g菌体和500ul提取液，振荡使之充分混合，再加入10％SDS100ul，氯化苄300ul，剧烈振荡，使管内混合物成乳状。50度保温1h，每隔10min振荡混合一次，然后加入300ul 3mol/LNaCl（ph＝5.2），混匀，冰水浴15min，6000rpm，15min，收集上清，加入等体积无水乙醇，室温沉淀20min，这时会有絮状沉淀出现。10000rpm，15min，沉淀用70％乙醇洗一次，室温尽量挥发残留的痕量乙醇，但不要让DNA完全干燥，加入50ulTEbuffer溶解DNA。
  提取液：0.1mol/LTris-HCL,PH=9.0+0.04mol/LEDTA,PH=8.0
  
  整个过程也就氯化苄可能需要购买，不过它的价格也非常便宜，500ml只需要32元。^_^

• vvmmoy (2013-7-22 13:52:04)

  QUOTE:

  原帖由 am10 于 2013-7-22 13:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  告诉你一种简便实用的提取酵母质粒的方法，其纯度完全可以用来测序和做PCR。你可以尝试一下。
  氯化苄提取真菌基因组的方法。在1.5ml Appendorf管中加入0.1g菌体和500ul提取液，振荡使之充分混合，再加入10％SDS100ul，氯化苄3 ...

  超级感谢。是不是这种方法也会把酵母核DNA一起沉淀下来?期望你的回答！

• vvmmoy (2013-7-22 13:52:20)

  
  氯化苄提取DNA的参考文献有没有呀？需要依据呀，谢谢！

• ROSE李 (2013-7-22 13:52:45)

  
  在高盐浓度条件下，DNA吸附于玻璃珠上，吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后，进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中。DNA回收率高而无降解，操作简单、快速、方便。
  
  我觉得楼上的这位说的不对,加入玻璃珠振荡是通过机械力来破碎酵母细胞壁的,而不是吸附DNA的,如果是用来吸附的话酵母基因组DNA不也吸附上了吗?
  玻璃珠SIGMA有,10克包装的270RMB,要定货,不过你可以用酶解的方法破壁.

• ROSE李 (2013-7-22 13:54:17)

  
  不知道一楼的那位提酵母的质粒的用途是做什么,还是找一个比较可信的方法做吧