【求助】纯化His标签的蛋白使用哪价的柱子比较好


最近做表达,65KD的蛋白,使用pET268载体,准备柱纯化,不知道改选择哪个公司的柱子比较好?第一次接触,还望大家帮忙

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  • am10 (2013-7-29 15:45:57)


    cuturl('www.wsac.cn') 有镍琼脂糖凝胶或者镍NTA琼脂糖凝胶都可以,此外也有装好的柱子.当然你也可以选择进口的.
  • remenb (2013-7-29 15:46:46)

    谢谢帮忙提供信息,你说的是不是国产的柱子?老板要求买进口的。qiagen和novagen的柱子怎么样?安玛西亚的预装柱卖多少钱呀?
  • 30moonriver (2013-7-29 15:49:36)


    qiagen的纯化柱子很多都是针对6His纯化的,Ni-NTA申请了专利的,novagen的柱子来自qiagen的授权;而且今年QIAGEN的价格又降低了,值得用!
  • remenb (2013-7-29 15:50:38)


    谢谢楼上 ,知不知道qiagen的1ml的预装柱多少钱一根?
  • yueban-1147 (2013-7-29 15:51:25)


    不是所有国产的就不好,原来有个国家重点实验室也用进口的Ni-NTA的也用国产的,后来发觉没差别,现在一直都用国产的,好象qiagen没1ml的预装柱,而国产预装柱单根卖,可用注射器也可以连AKTA操作.安玛西亚的预装柱不单根卖.
  • 49888 (2013-7-29 15:51:58)


    我用的是Amylise-resin 亲和层析柱。你可以试试
  • 30moonriver (2013-7-29 15:52:40)

    作高通量,快速,小规模纯化的实验室里柱子的数量和种类非常多,一般来自两三个公司,因为不同的柱子适用于不同的蛋白纯化,很正常。

    QIAGEN没有1ml的预装柱,但是有15分钟内纯化多达150ug 6His-tagged 蛋白的Ni-NTA Spin Columns,一个试剂盒里有50根(货号31014),价钱2500元左右。
  • zzzz (2013-7-29 15:53:11)


    看你要求纯化的速度吧, 如果想很快要结果,那就最好选国外的FAST FLOW 系列, 如果不大要求速度的话, 国内的也是可以的,孵育时间长点也是很好的
    国外的 推荐使用:GE Healthcare 的ni柱
  • remenb (2013-7-29 15:55:28)

    QUOTE:

    原帖由 30moonriver 于 2013-7-29 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    作高通量,快速,小规模纯化的实验室里柱子的数量和种类非常多,一般来自两三个公司,因为不同的柱子适用于不同的蛋白纯化,很正常。

    QIAGEN没有1ml的预装柱,但是有15分钟内纯化多达150ug 6His-tagged 蛋白的Ni-NTA Spin Colum ...
    Ni-NTA Spin Columns,是不是离心柱式的呀?如果是的话,那用起来一定很方便。
  • remenb (2013-7-29 15:56:07)

    GE Healthcare的柱子真不单卖吗?
  • 30moonriver (2013-7-29 15:56:45)

    Ni-NTA Spin Columns是即用型分离柱,Ni-NTA Spin Kit(货号31314) 除了包括 50 Ni-NTA Spin Columns,还有Reagents,Buffers,Collection Tubes,1ug Control Expression Plasmid,打折后3000块左右吧。这个盒子是中等规格的,纯化范围15-150ug,QIAGEN还有用于小规格1-30ug纯化的基质(Ni-NTA Magnetic Agarose Beads),和大规格100ug-100mg纯化的基质(Ni-NTA Agarose, Ni-NTA Superflow)

    详细信息可见cuturl('http://www1.qiagen.com/Products/Protein/Purification.aspx'),每个产品还有handbook可供参考。
  • birdfish (2013-7-29 15:57:15)


    什么叫即用型分离柱?
  • finger (2013-7-29 15:57:37)


    请问:哪里有卖空柱子的(用注射器就可以进行纯化的)?我现在有树脂,没柱子了。谢谢
  • star#room (2013-7-29 16:01:11)


    GE Healthcare的结合蛋白的能力非常好,而且也有小包装的(25ml),买回来自己装一个柱子就好了
    也可以不装柱子,直接将beads加进细菌裂解液,在离心管里面洗涤洗脱就好了