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【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗?
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发表于: 2013-7-31 17:13 作者: zwsyrt 来源: 分析测试百科网
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【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗?
我把细胞提得蛋白样品丢在室温中6小时左右,不知道会不会降解?有什么办法可以快速检测?
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【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗?
我也来说两句
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tangxin_80
(2013-7-31 17:14:14)
根据我的经验:对于不同的蛋白,其是否容易降解的程度不一样。一般的,分子量大的,容易降解。你可以对目的蛋白做个Western检测,看其是否有降解。
nut6694
(2013-7-31 17:14:33)
一般不会降解
yonger
(2013-7-31 17:15:21)
不同的蛋白差异很大,降解速度也不同,同一种蛋白里不同的分子量大小降解速度也不同,不知是否加了蛋白酶抑制剂,细胞裂解液一般可加入如PMSF 等蛋白酶抑制剂,且一般要放在低温,最好负80度。
不知是否要作WB,如没有蛋白酶抑制剂,如做WB,可将蛋白定量后用上样缓冲液稀释然后变性,这样在常温下降解较少,另为确定蛋白降解的程度及具体哪些蛋白降解,可先跑PAGE,染下看看。
zwsyrt
(2013-7-31 17:16:26)
谢谢各位,我的蛋白是已经加了裂解液包括蛋白酶抑制剂的,本来是保存在液氮口的,准备作WB,后来取细胞时忘了放回去,就吊在外面,6小时后才发现。我的目标蛋白分子量在50-60左右。今天跑了一下,还转了膜,丽春红染色后和以前差不多,不知道是不是就没有完全降解了?杂一抗还有没有意义?
wood533
(2013-7-31 17:16:50)
如果室温放了一天一夜呢?包含体15KD左右。
idea2011
(2013-7-31 17:17:26)
谢谢各位,我的蛋白是已经加了裂解液包括蛋白酶抑制剂的,本来是保存在液氮口的,准备作WB,后来取细胞时忘了放回去,就吊在外面,6小时后才发现。我的目标蛋白分子量在50-60左右。今天跑了一下,还转了膜,丽春红染色后和以前差不多,不知道是不是就没有完全降解了?杂一抗还有没有意义?
===========
问题不大
zwsyrt
(2013-7-31 17:18:03)
虽然立春红染过后有条带,可是片压出来什么都没有?按以前摸索过的条件,就是说除了蛋白样品其他的都没有改变。那是不是说蛋白降解了?
XYZQ
(2013-7-31 17:18:56)
我把细胞提得蛋白样品丢在室温中6小时左右,不知道会不会降解?有什么办法可以快速检测?
========================================
你可以用考马斯亮蓝染下色看看。就知道有没有降解
89tongzijun
(2013-7-31 17:19:59)
你可以用考马斯亮蓝染下色看看。就知道有没有降解
====================================
请问一下如何用考马斯亮蓝染色就可以确定的
呀
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【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗?
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tangxin_80 (2013-7-31 17:14:14)
nut6694 (2013-7-31 17:14:33)
一般不会降解
yonger (2013-7-31 17:15:21)
不同的蛋白差异很大,降解速度也不同,同一种蛋白里不同的分子量大小降解速度也不同,不知是否加了蛋白酶抑制剂,细胞裂解液一般可加入如PMSF 等蛋白酶抑制剂,且一般要放在低温,最好负80度。
不知是否要作WB,如没有蛋白酶抑制剂,如做WB,可将蛋白定量后用上样缓冲液稀释然后变性,这样在常温下降解较少,另为确定蛋白降解的程度及具体哪些蛋白降解,可先跑PAGE,染下看看。
zwsyrt (2013-7-31 17:16:26)
谢谢各位,我的蛋白是已经加了裂解液包括蛋白酶抑制剂的,本来是保存在液氮口的,准备作WB,后来取细胞时忘了放回去,就吊在外面,6小时后才发现。我的目标蛋白分子量在50-60左右。今天跑了一下,还转了膜,丽春红染色后和以前差不多,不知道是不是就没有完全降解了?杂一抗还有没有意义?
wood533 (2013-7-31 17:16:50)
如果室温放了一天一夜呢?包含体15KD左右。
idea2011 (2013-7-31 17:17:26)
===========
问题不大
zwsyrt (2013-7-31 17:18:03)
虽然立春红染过后有条带,可是片压出来什么都没有?按以前摸索过的条件,就是说除了蛋白样品其他的都没有改变。那是不是说蛋白降解了?
XYZQ (2013-7-31 17:18:56)
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你可以用考马斯亮蓝染下色看看。就知道有没有降解
89tongzijun (2013-7-31 17:19:59)
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请问一下如何用考马斯亮蓝染色就可以确定的呀
【求助】蛋白样品在室温放了6小时会降解吗?