【求助】蛋白提取液与上样缓冲液一起100℃煮沸，暴沸...

最新回复

• ero11 (2013-8-01 10:31:45)

  
  可以敞开来煮的，不过蛋白提取液和上样缓冲液的总体积要多一点，煮沸10分钟就可以了

• 3648755 (2013-8-01 10:32:08)

  谢谢！你们一直都是敞开来煮吗？
  敞开来煮没有蒸发吗？蛋白浓度不就会变吗，和定量时的蛋白浓度有差别了？如果是同一批蛋白样品，同时处理好像问题不大，不同批次之间不就有问题了？

• ero11 (2013-8-01 10:32:54)

  
  我平时样品处理是按照这个体系来做的，5ul蛋白样品+5ul的5x上样缓冲液+15ul的缓冲液（与蛋白样品的缓冲体系一样）即25ul的体系，等水煮沸后将样品放入加热10分钟即可，在整个煮的过程中是盖着盖子的。我试过了没有喷开，对了还有一个小小的提示，就是不要把EP管完全插到泡沫板上，盖子端离泡沫板表面留一点距离，也可以防止盖子喷开，不过水要保证足够，我知道的也就这么多了，希望能帮到你。

• gogo (2013-8-01 10:33:14)

  给个我的方法给你参考
  在塑料泡沫上面挖几个和EP管一样的洞洞，然后将蛋白样品和上样缓冲液混起放到EP管里面，盖上盖子煮沸10min 就可以了，不会爆炸的，我每次都试这个方法的

• 3648755 (2013-8-01 10:33:32)

  
  谢谢！
  我平时采用的方法基本也是如此，蛋白样品和上样缓冲液每管中有200ul，偶尔就是有把盖子冲开的。昨天我还特意加了封口胶，盖子开了，但液体好像没有少。谢谢交流！

• DNA (2013-8-01 10:33:50)

  打洞呀。
  
  用注射器的针头在酒精灯上烧红，然后打洞呀。
  
  塑料会融化的

• 131415 (2013-8-01 10:34:27)

  可以用PCR仪的预热

• taoshengyijiu (2013-8-01 10:34:51)

  我的蛋白从来都没有这种情况，因为管里的液体本身就很少，但是如果煮别的话我的处理方法是在旁边看着，过个5分钟拿出来打开一下。笨法，大家切莫见笑，觉得比较保险，又不会损失样品。

• zhenxin (2013-8-01 10:35:19)

  
  用封口膜封上就好了，然后等水煮沸以后，把小管插到塑料泡沫上，不要完全插进去，留一段距离，扔到水里就行了

• xiaoxiaoniao (2013-8-01 10:35:55)

  
  请问你用的是什么技术，为什么要煮沸啊，我做的2-D，上样前要煮沸蛋白提取液和上样缓冲液吗

• abc816 (2013-8-01 10:39:38)

  
  爆开是因为管子里面的气体受热
  建议换小容积的ep管，插在塑料泡沫板上，等水煮开之后放进去，煮个5min够啦
  我一般是用个长镊子夹住泡沫板煮，不会让水漫过ep管口
  才5min，可以坚持，这样子放心

• 二丫头466 (2013-8-01 10:40:30)

  暴开很明显不好，因为不论是有液体进到ep管里还是里面的液体蒸发出来，都会导致最终的体积与之前计算的不符合，直接导致上样量不一致。
  其实也很好解决，无非两个办法，要么让他透气，要么直接封死
  我试过几个办法都不错，说出来供大家参考
  1.用细胞冻存管，这个拧死了，怎么也不会漏。记得煮完以后轻轻离一下，把壁上的水蒸气甩下来，否则的话还是不准
  2.细胞冻存管比较贵，还可以用封口膜封死。后面的处理一样
  3.用针在ep管顶上钻个小洞，这样怎么也不会暴开
  4.煮的时候在旁边看着，用一个大点的镊子夹住，只让液面稍微超过你的样本，不到管口就可以，就算暴开了也不会进去，拿出来盖上继续
  有人说，明明测了蛋白，怎么还不一致，这和煮的过程有很大关系哦。如果大家觉得说得有一点点道理，就顶一下咯。o(∩_∩)o.....

• ha111 (2013-8-01 10:41:22)

  
  晕了，你直接买个进口的AP管不就行了
  也很便宜，就是平时用来提RNA的。盖子盖紧就行，我们煮了盖子从来没暴开过。国产的就不行。

• 66小飞侠 (2013-8-01 10:44:07)

  
  用9号针头戳洞吧，呵呵
  简单

• bring (2013-8-01 10:51:50)

  
  0.5ml和1.5ml的EP管都煮过，封口胶封好口，最多200ul，从没有爆开口过。

• yjf1026 (2013-8-01 10:52:45)

  可以试着用锡纸包一下，我一般都包，感觉保险~

• ritou1985 (2013-8-01 10:53:38)

  
  夹个夹子，100度20分钟都不容易喷了

• zzzz (2013-8-01 10:54:28)

  
  同意楼上的 我们都是用夹子夹住煮的。不会爆开，沸水也不会进到EP管中