【求助】酶活性有但条带无，怎么回事？

最新回复

• rxcc33 (2013-8-01 12:58:48)

  银染法染色试过了吗？不行，再跑一下PAGE看看。

• 8s5g (2013-8-01 12:59:07)

  
  0.6ug/ul里面是总蛋白的浓度吧，那你提取的样品会不会有其他很多杂蛋白？不排除里面大部分是杂蛋白，目的蛋白就很少咯，建议换一种更加灵敏的染色方法看看。

• vcve (2013-8-01 12:59:26)

  
  你应该再提供一些较详细的信息，比如你目的蛋白的分子量，配制分离胶的浓度，是否用蛋白marker。可能原因：1）像楼上的战友说的:目的蛋白含量低，考染没有条带，可以考虑银染，或浓缩后在上样，或跑PAGE。2）用蛋白marker作比较，排除是否因为分离胶不合适分离目的蛋白，如果目的蛋白小于2kD，可考虑用tricine-page。

• cwcwcww (2013-8-01 12:59:48)

  
  我觉得是不是你作用于特定底物本身反应就很灵敏，而当你跑SDS-PAGE的时候，很多情况是反应不如原来那样的明显？

• ququer787 (2013-8-01 13:00:16)

  
  谢谢各位大侠，我再补充下信息吧：酶大约50kd，MARKER SM 0671，10%分离胶；之前跑胶的话MARKER都是很漂亮的。之前考虑过银染，但老板考虑还是先用考马做。对于楼上战友所说的浓缩，不知具体方法是什么？简单查了下，常用的真空冷冻干燥我们这边做不了~谢谢！

• gmjghh (2013-8-01 13:00:38)

  我们这边浓缩一般用超滤管，或是透析袋+PEG

• 韩梅梅 (2013-8-01 13:01:01)

  
  浓缩办法有多种：
  一种是用透析袋，在50%甘油buffer里透析，甘油还有稳定没活性的作用。
  一种是装在透析袋里，外面用聚乙二醇，不过透析袋的分子孔径要小于聚乙二醇的分子量，如用3000的透析待。

• applebook=213 (2013-8-01 13:01:20)

  你的目的蛋白在总蛋白中的比例太小了，可以尝试用ｔａｇ后纯化做，否则文章都不好发啊

• HPLC使者 (2013-8-01 13:01:39)

  试一试wb.