【求助】关于蛋白定量

最新回复

• viviwang1987 (2013-8-03 09:00:57)

  
  呵呵，western最多是半定量，而且问一句，你有这种营养因子的标准品么？否则你的定量从何谈起。
  其实，如果想定量，可以考虑RTPCT，间接的通过mRNA来考虑。
  如果，你们手头有足够的质谱机时，你老板又足够有钱，可以做标记，可以考虑质谱定量，不过也不是完全准确，但是比western好点，最好是结合western的结果一起说。（这个问题是质谱本身的原理导致的，很难解决）
  对于蛋白质的绝对定量，目前没有很完美的办法，但是相对定量用western，质谱，甚至色谱纯化都可以做到（前体是你有这个蛋白的标准品）。

• PINK (2013-8-03 09:01:35)

  
  你是指脊髓液中神经营养因子的含量吗？你可以用ELISA的方法进行定量；如果是脊髓组织中，只能用westen的方法了；不过从你的题目中看到--“如含多少微升”没有明白，一般的单位应该是xx ug/ml或者更低 xx ng/ml；用ELISA作一个标准曲线，再计算样本的含量；

• 算盘阿星 (2013-8-03 09:01:56)

  
  谢谢楼上两位
  我对实验技术不太懂
  让各位见笑了
  
  我是想测量脊髓组织中的某种神经营养因子蛋白含量，
  western的话怎么通过灰度来计算到含量呢？
  会不会比ng还小呢
  多谢
  再次请教
  您的帮助会让我少走很多弯路

• 算盘阿星 (2013-8-03 09:02:20)

  
  另外想问
  神经营养因子没有标准品吗？
  如bdnf 或gdnf

• PINK (2013-8-03 09:02:46)

  另外想问
  神经营养因子没有标准品吗？
  如bdnf 或gdnf
  
  =========================================
  
  标准品肯定是有的，你在CST or santa cruz公司查下。

• PINK (2013-8-03 09:04:19)

  谢谢楼上两位
  我对实验技术不太懂
  让各位见笑了
  
  我是想测量脊髓组织中的某种神经营养因子蛋白含量，
  western的话怎么通过灰度来计算到含量呢？
  会不会比ng还小呢
  多谢
  再次请教
  您的帮助会让我少走很多弯路
  
  ===========================================================================================================
  
  单纯地检测组织中的神经营养因子的含量没有太大意义；
  
  western一般会用于检测蛋白水平的变化情况，以及某种修饰的变化情况；你要明白如果仅仅是检测单组织中的含量有什么意义呢？难道你要和标准品的灰度值相比吗？如果它在你的处理中没有变化或者没有参与你的某种处理过程，是没意义的；
  
  至于是多少量，这个就更难说清楚，谁知道是多少ng或者更高或更低，你要查文献才知道；
  
  总体感觉你没有明确的实验设计方案与思路，与你所掌握的背景知识少有很大关系，想小走弯路的最有效的办法是读文献

• 算盘阿星 (2013-8-03 09:04:49)

  QUOTE:

  原帖由 PINK 于 2013-8-3 09:04 发表
  谢谢楼上两位
  我对实验技术不太懂
  让各位见笑了
  
  我是想测量脊髓组织中的某种神经营养因子蛋白含量，
  western的话怎么通过灰度来计算到含量呢？
  会不会比ng还小呢
  多谢
  再次请教
  您的帮助会让我少走很多弯路
  
  ========== ...

  
  谢谢你的热心指教，我查文献也没有看到有测量神经营养因子在组织中的具体含量的，但是我的实验里就是想知道他的具体含量，想根据某种状态下的组织内神经营养因子含量决定外源给予的量。

• PINK (2013-8-03 09:05:13)

  
  外源性加入的神经营养因子的量与药物的活性，与受体的结合能力有关；一般情况下可能要用到uM级别；
  
  印象中IGF-I的使用量是10ng/ml，在原代神经元的培养中的加入量；与细胞类型也有一定的关系。不知是否适合的研究需要。

• 算盘阿星 (2013-8-03 09:06:05)

  多谢
  我的想法就是:在机体自身能够“代偿”时测定组织内的某种神经营养因子的含量，
  然后在机体某种病态时不能自身代偿，所以我想看能不能将这种测得的含量给予不能代偿的机体

• PINK (2013-8-03 09:06:57)

  QUOTE:

  原帖由 算盘阿星 于 2013-8-3 09:06 发表
  多谢
  我的想法就是:在机体自身能够“代偿”时测定组织内的某种神经营养因子的含量，
  然后在机体某种病态时不能自身代偿，所以我想看能不能将这种测得的含量给予不能代偿的机体 ...

  如果你想做某种病态下所加入的营养因子的有效浓度，设计思路不是你这样考虑的，应该是如果加入的营养因子有代偿作用或者保护作用，你首先要设计不同的药物浓度加入处理组织中，观察组织或细胞的状态与功能恢复情况，在最佳“代偿”作用或保护作用时的浓度同时又没有明显毒副作用才是最好的浓度。
  
  不知回答是否能满足你的设计需求。

• XYZQ (2013-8-03 09:08:20)

  你是指脊髓液中神经营养因子的含量吗？你可以用ELISA的方法进行定量；如果是脊髓组织中，只能用westen的方法了；不过从你的题目中看到--“如含多少微升”没有明白，一般的单位应该是xx ug/ml或者更低 xx ng/ml；用ELISA作一个标准曲线，再计算样本的含量；
  
  =================================
  
  为什么脊髓中的组织只能用westen的方法？？