【转帖】strip方法

最新回复

• ukonptp (2013-8-03 11:29:36)

  
  我已经试过了，效果很好。回去用了觉得好的，来顶一下啊。让你摆脱了臭味和加热的步骤。

• 雪原 (2013-8-03 11:29:55)

  
  谢，还是55度水浴加热吗？

• c86v (2013-8-03 11:30:14)

  
  是在室温吗？

• ffooll (2013-8-03 11:30:30)

  
  能介绍一下反应条件吗？

• avi317 (2013-8-03 11:30:49)

  
  这个不算是原创了.低pH值(一般是2.2,对于IP上的pH为2.55)是比较温柔的stripping策略，可以55度稍加热，效果更好. 0.1M glycine就够了，没必要1M这么浓,还可以加1% Tween20.

• zzzz (2013-8-03 11:31:16)

  strip 是把一抗和二抗去除，还是把所有的蛋白都去掉了。
  楼主说做完了从封闭开始，可我们老师说从转膜开始。
  到底怎样，各位帮帮忙啦···

• nn255 (2013-8-03 11:31:35)

  
  楼主说的是酸解法，我在 蛋白质印迹手册 上看过，配方无多大差异。
  我试过一次，但感觉抗体去除的效果不是很好。楼主你做的时候可以去除吗？

• ukonptp (2013-8-03 11:31:51)

  
  只是去除一抗和二抗，效果很好啊。我用ECL显色，看不到以前的条带。

• nn255 (2013-8-03 11:32:17)

  QUOTE:

  原帖由 ukonptp 于 2013-8-3 11:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  只是去除一抗和二抗，效果很好啊。我用ECL显色，看不到以前的条带。

  具体方法步骤是什么
  你用的是nc膜吗

• ukonptp (2013-8-03 11:32:58)

  具体步骤就是按照帖子上写的溶液，一个接一个用摇床室温摇5min。我用的PVDF膜，推荐用PVDF膜，有些时候NC膜效果没有PVDF膜好。

• DONT (2013-8-03 11:33:29)

  找到一个western的strip方法和我以前用的很不一样，而且简单很多。不用巯基乙醇，这个东西很难闻。
  1，1M glycine(pH2-3，2最好) 5min
  2, PBS 5min
  3, 1M Tris-Hcl(pH 7.5) 5min
  接下来就是封闭。。。。。。
  
  ======================================================================================================
  
  我现在在国外的一个实验室，他们就是用的这个protocol,具体出处我也不知道。标题改成转载。只用在室温下用摇床摇就行了。效果很不错。
  
  第二步用TBST洗可以吗？因为我用的是TBST缓冲液，楼主你是用PBS吗？
  

• 00无名指00 (2013-8-03 11:34:15)

  
  1、用25mM,glycine-HCl（PH=2）、1%（w/v）SDS洗膜30min摇床上进行
  2、PBS洗涤两次，每次10min
  然后继续进行膜的封闭。
  这种方法我使用过多次，效果还可以，操作简单。用PVDF膜。

• DONT (2013-8-03 11:34:33)

  
  请问：有战友用NC膜试过吗？我用的是NC膜，试过一次感觉还是有条带。
  
  因为我做的bata-actin和P38分子量差不多所以得搞清楚能否彻底清除抗体。

• ukonptp (2013-8-03 11:34:55)

  第二步用TBST洗可以吗？因为我用的是TBST缓冲液，楼主你是用PBS吗？
  
  ===================================
  
  我有次用错了，用成TBST了，效果不怎么好。

• ukonptp (2013-8-03 11:35:13)

  请问：有战友用NC膜试过吗？我用的是NC膜，试过一次感觉还是有条带。
  
  因为我做的bata-actin和P38分子量差不多所以得搞清楚能否彻底清除抗体。
  
  ===========================================================================================================
  
  应该是可以的。
  根据GEHealth ECL说明书，只有用荧光显色（chemifluorescent)，才对膜有要求，只能用PVDF膜，用化学发光(Chemiluminescent)对膜没有限制。
  Stripping and reprobing membranes -chemifluorescent signal: The treatment required is too harsh for nitrocellulose and will either destroy or extensively
  damage the membrane.

• ukonptp (2013-8-03 11:35:29)

  strip 是把一抗和二抗去除，还是把所有的蛋白都去掉了。
  楼主说做完了从封闭开始，可我们老师说从转膜开始。
  到底怎样，各位帮帮忙啦···
  
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  去除所有蛋白，可能需要很强的洗脱液吧，我没做过，从来没有重复使用过膜，你们老师太猛了。不怕残留啊。我提到的strip只是洗脱一抗二抗，当然膜上蛋白也会有一些丢失。

• DNA (2013-8-03 11:36:04)

  
  怎么可能从转膜开始呢？已经是膜了~莫非是从膜转到另一张膜上？