【求助】蛋白质电泳

最新回复

• hustwb (2013-8-03 16:37:05)

  
  这个分析起来可能的原因很多，
  根据你的描述来看，问题很可能在电泳上，而不是在蛋白的提纯上
  比如染色液是否配制时间太长或重复利用太多次
  AP、电泳缓冲液是否配制时间太长等
  AP是很容易坏的，分子克隆上说AP在4度只能保存一周的时间
  
  以前，我的染色液时间长了就容易使条带模糊，向有水雾似的
  
  这方面的帖子不少，你可以搜搜看

• 小游abc (2013-8-03 16:37:28)

  
  染色液我用新配制的，APS放置超过一周就不再使用了，可是带形还是模糊，电泳槽缓冲液发生渗漏与带的畸变有关吗？

• hustwb (2013-8-03 16:37:45)

  
  你电泳一般要用多少时间啊？
  
  电泳时凝胶必须浸在缓冲液里，垂直板电泳仪缓冲液渗漏很容易使胶的加样孔端暴露在缓冲液外面，决对不能让缓冲液渗漏！不知道你说的是不是这种情况。
  
  另外还有一种可能，有些人有时粗心会忘记把配胶时的胶条取下，建议你对照实验步骤仔细看看有没有什么遗漏。

• 小游abc (2013-8-03 16:38:12)

  
  我电泳一般要用3个小时，用的是垂直板电泳仪，电泳时上槽的缓冲液总是渗漏，也许是这个原因，多谢了，以后我得注意了。

• newway (2013-8-03 16:38:48)

  
  3h的电泳时间，使用的电泳槽系统是国内厂家的老产品吧，现在一般的小型蛋白电泳系统只要1h左右。当然，胶厚度越厚，电泳时间越长。
  对于漏液，实在没有办法的话只有在一旁监视，隔一定时间补加电泳缓冲液，条带扭曲往往是电压不均匀引起，一定不能让上层电泳缓冲液低于玻璃板沿，否则，条带扭曲不可避免。
  
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  我电泳一般要用3个小时，用的是垂直板电泳仪，电泳时上槽的缓冲液总是渗漏，也许是这个原因，多谢了，以后我得注意了。

• kewanqi2011 (2013-8-03 16:39:12)

  可能是由于蛋白样品在跑完电泳以后有些扩散，可先用固定液固定，然后再染色。还可以加大浓缩胶与分离胶的比例，让样品在浓缩胶中充分压缩，这样跑完电泳以后条带会紧凑一些。为了避免条带畸形，电极上的白金丝一定要直，不能弯曲，此外胶也要均一

• idea2011 (2013-8-03 16:39:36)

  
  我刚开始做的时候也出现过这样的问题。后来在配loading buffer和凝胶的时候全部用了去离子水，就没出现过这样的问题。因为我 开始的时候用的都是超纯水。
  可能还是哪种溶液/试剂出了问题，建议你使用新配制的试剂，试试看吧。
  祝你好运！！

• 小游abc (2013-8-03 16:39:57)

  
  多谢各位大虾，我已经把溶液重新配了一遍，电泳结果还是可以的，现在就是期待目的蛋白的表达了。
  
  nanfangyun 我们实验室主要不是研究蛋白这块的，所以一些仪器还是用国产的，3h算是快的了。

• wu11998866 (2013-8-03 17:04:03)

  
  你用的是什么电泳槽呢?能说说型号吗?如果用六一厂的28A的话,3个小时不算慢了.你的蛋白带型多吗?如果条带不多的话,那么你的提样很可能有问题,正常情况下,植物材料提出的蛋白应该是很多的.除非你做的是组培的不同发育阶段的材料.关于AP的存放,你可以配制几毫升然后分装在0.5mL的离心管里,-20度保存,要用的时候拿一管出来化冻使用,用完了就扔掉,一次性使用.我们实验室就是这样的,放一年也不会有问题.电泳槽会漏不会有这么严重的后果,除非你上槽的缓冲液漏得低于胶的顶端了,如果没有,你在电泳过程中随时补是不会出再这种情况的,只是会让你的样品跑的难看一些而已.我个人倾向于你的提样过程有问题,可能离子浓度太高或者除盐不充分,这是会影响到你的电泳结果的.而提样虽然有方法,可是不同的材料是有一些不一样的.你没有具体说材料名称,所以无法帮你分析了.

• redbutterfly (2013-8-03 17:04:24)

  
  我也在这向各位大侠咨询下，我最近用TCA-丙酮沉淀法和Tris-HCl法提的植物叶片蛋白，用银染法， Tris-HCl法只能看到四五条带，也只一两条带清晰，另外两三条带则是模糊不清？而请问TCA-丙酮沉淀法根本就没带？这是什么原因？