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【求助】溶解的蛋白质溶液是不是应该是澄明的
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发表于: 2013-8-10 09:10 作者: nvdabing 来源: 分析测试百科网
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【求助】溶解的蛋白质溶液是不是应该是澄明的
我的样品中含酸和盐,用蒸馏水透析的时候有蛋白质的沉淀析出,用0.05mol/L Na2HPO4溶解,是浑浊的溶液,是不是蛋白质变性导致不溶了?
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【求助】溶解的蛋白质溶液是不是应该是澄明的
我也来说两句
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98776langtao
(2013-8-10 09:10:55)
可能是有蛋白沉淀。溶液很浓时也有浑浊的现象。
6327555
(2013-8-10 09:11:16)
蛋白浓度高>10mg/ml的时候一般溶液变的很浑浊。还有用硫酸铵沉淀后再溶解时,有时候也不是很透明,可能有杂质和色素。
蒸馏水透析的时候,蛋白质都有少量的沉淀。蛋白质比较稳定的在PBS.
nvdabing
(2013-8-10 09:11:37)
PBS是不是指Na2HPO3+NaH2PO4,需不需要加NaCl呢?
98776langtao
(2013-8-10 09:17:01)
PBS 有好几样配方,有不同离子强度的和缓冲容量的,具体做什么实验参与相应的配法。如darzy 所说,有时杂质也会使溶液泛浑,脂类什么的。
nvdabing
(2013-8-10 09:17:26)
我怀疑是PH的变化使得蛋白沉淀?
主任可以介绍一下配方吗?
谢谢啊!
am10
(2013-8-10 09:18:11)
PBS
10-20mM Na-P,150mM NaCl.pH 7.3-7.4.
有钾离子更好。
ritou1985
(2013-8-10 09:18:57)
PH、离子强度的改变都会导致蛋白质在透析后沉淀。我的经验是加入1%的甘氨酸和5%的甘油,这些物质会干扰蛋白质的聚集。
flower-201
(2013-8-10 09:19:13)
我觉得与蛋白质的等电点也有关系。
上次我用PB(不含Nacl的PBS,PH7.4)溶解蛋白(碱性蛋白),结果一段时间后也出现了沉淀,而且很不易溶。最后我为了测定蛋白浓度只好将之在37度水浴溶解后再测。(我的蛋白是变性的,线性表位即可)
我想下次用PH稍高的缓冲液溶解蛋白
kuaizige
(2013-8-10 09:19:39)
我做过PB和PBS的透析的比较,发现PBS比PB出现的沉淀量减小了很多,出现的个例也少了很多。
yonger
(2013-8-10 09:20:05)
蛋白浓度高>10mg/ml的时候一般溶液变的很浑浊。还有用硫酸铵沉淀后再溶解时,有时候也不是很透明,可能有杂质和色素。
蒸馏水透析的时候,蛋白质都有少量的沉淀。蛋白质比较稳定的在PBS.
=======================================================
请问用去离子水透析时出现的沉淀是因为变性了吗?如何处理这些沉淀?
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98776langtao (2013-8-10 09:10:55)
可能是有蛋白沉淀。溶液很浓时也有浑浊的现象。
6327555 (2013-8-10 09:11:16)
蒸馏水透析的时候,蛋白质都有少量的沉淀。蛋白质比较稳定的在PBS.
nvdabing (2013-8-10 09:11:37)
PBS是不是指Na2HPO3+NaH2PO4,需不需要加NaCl呢?
98776langtao (2013-8-10 09:17:01)
PBS 有好几样配方,有不同离子强度的和缓冲容量的,具体做什么实验参与相应的配法。如darzy 所说,有时杂质也会使溶液泛浑,脂类什么的。
nvdabing (2013-8-10 09:17:26)
主任可以介绍一下配方吗?
谢谢啊!
am10 (2013-8-10 09:18:11)
PBS
10-20mM Na-P,150mM NaCl.pH 7.3-7.4.
有钾离子更好。
ritou1985 (2013-8-10 09:18:57)
PH、离子强度的改变都会导致蛋白质在透析后沉淀。我的经验是加入1%的甘氨酸和5%的甘油,这些物质会干扰蛋白质的聚集。
flower-201 (2013-8-10 09:19:13)
上次我用PB(不含Nacl的PBS,PH7.4)溶解蛋白(碱性蛋白),结果一段时间后也出现了沉淀,而且很不易溶。最后我为了测定蛋白浓度只好将之在37度水浴溶解后再测。(我的蛋白是变性的,线性表位即可)
我想下次用PH稍高的缓冲液溶解蛋白
kuaizige (2013-8-10 09:19:39)
我做过PB和PBS的透析的比较,发现PBS比PB出现的沉淀量减小了很多,出现的个例也少了很多。
yonger (2013-8-10 09:20:05)
蒸馏水透析的时候,蛋白质都有少量的沉淀。蛋白质比较稳定的在PBS.
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请问用去离子水透析时出现的沉淀是因为变性了吗?如何处理这些沉淀?
【求助】溶解的蛋白质溶液是不是应该是澄明的