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【求助】我的SDS-PAGE胶怎么老拖尾？

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-8-10 09:46    作者: 没良心55    来源: 分析测试百科网

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【求助】我的SDS-PAGE胶怎么老拖尾？
如图，右边的是97—14kd的MARKER， 可是大分子的带居然丢了；左边的是我的样品，可以看到最上面的大蛋白拖尾严重，我的配方：浓缩胶4%，分离胶12.5%，上10微升，70伏-135伏
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  • ero11 (2013-8-10 09:46:51)


    电泳拖带可能与样品有关，不过你的电泳的确跑得不太好，maker都不清晰，从你拖带的状态来看，一方面样品的离子强度是否太高，另一方面胶的放置时间是不是太久。

  • 33号 (2013-8-10 09:47:14)

    我觉得：
    1.可能主要是你样品的问题
    2.换较低点的电压跑试试
    3.你的胶可能没配好，浓缩胶5％试试

  • 没良心55 (2013-8-10 10:51:47)

    我的样品都离心过了，可还是有拖尾，是不是浓度太高了？我这个G-50的第一个洗脱峰，可能分子量太大了，我想换成10%的分离胶

  • hustwb (2013-8-10 10:52:49)

    认为楼主不用再改了，10％和12.5％的对你的样品应该不会有太大的改善，提供两点小小建议：
    1、配胶前确定一下你的2种buffer pH是否为6.8和8.8
    2、可能是样品离子强度真的太大了

  • dongdongqiang (2013-8-10 10:53:06)

    会不会是样品变性时没处理好，100度变性10 min，然后上样前14000 rpm离心1 min，然后取上清电泳试试

  • 莲花白 (2013-8-10 10:54:45)


    你的sample是不是已经被degrade掉了?

  • kuaizige (2013-8-10 10:56:00)

    样品量少了点，Marker都不明显，上20ul看看，第二步电压加到200v

  • qqq111 (2013-8-10 10:56:23)


    我个人认为，可能是你的样品处理液，也就是你的buffer可能是最大的问题。你可以重新换一个buffer试试。还要就是你的电泳缓冲液也要看看PH值对不对。

  • sunnyB (2013-8-10 10:57:27)


    上样缓冲液与电泳缓冲液都按照说明书重新配置，一个师兄曾经用别人的液体电泳，出现你这种问题。另外样品浓度加大一些。

  • duoduo (2013-8-10 10:57:52)


    我的建议:1.样品离子强度太高
    2.注意buffer 的PH值:分离胶:8.8 ,浓缩胶:6.8
    3.胶是否放久了

  • pengke1983 (2013-8-10 10:58:11)


    我也遇到过这种情况，不知哪里出问题，很多时候电泳缓冲液重配一下就好了。

  • 831226 (2013-8-10 11:00:16)


    缓冲液的ph对电泳带型影响非常大，前几天刚经历过，ph必须得精确到0.1
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