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【讨论帖】WB半干转膜大分子量讨论

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-8-10 16:43    作者: cj_mondy    来源: 分析测试百科网

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【讨论帖】WB半干转膜大分子量讨论

半干转膜，小分子量（40-60KD），恒流，电流为面积*2.5，时间30min，效果很好！但是大分子量（140-220KD）,恒流，电流也是面积*2.5，时间为1小时，没有看见条带，包括140KD和220KD都没有看见！有经验的战友请指点！
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  • IAM007 (2013-8-10 16:44:01)

    我感觉电流偏大,我用面积*1-1.5mA,一般40-60kD的70分钟,面积*1.5-2mA,140-220KD两小时是可以的,最好做一下预实验,看一下marker的转膜情况再决定

  • cj_mondy (2013-8-10 16:45:14)

    谢谢指导，试一试看！我的大分子量现在做的非常郁闷！就是不见条带！

  • bling (2013-8-10 16:45:31)

    140-220KD 我用0.25-0.5mA 4摄氏度 4到5个小时可转膜完全。最好做一下预实验,看一下marker的转膜情况再决定。

  • 00无名指00 (2013-8-10 16:56:49)

    同感，大分子量太难做

  • cj_mondy (2013-8-10 16:57:34)

    最近解决了!湿转！还在摸索中的同志们湿转吧！！效果很好

  • sr9971 (2013-8-10 16:58:50)


    大于100K当然要用湿转
    小于100K可以用半干
    半干效率较低

  • ququer787 (2013-8-10 16:59:28)


    我也是做135和155KBD的，半干转，每平方面积2mA,2个半小时，marker和蛋白都转得很好！希望对你有帮助！

  • zhezhe (2013-8-10 17:00:04)

    请问一下，
    你的湿转条件是多少，湿转液的配方是什么呢？我一直在做135kd的很郁闷只做出来过一次！谢谢了，真的希望按你的成功条件做出来

  • tuomu45 (2013-8-10 17:00:31)

    大家湿转吧，25V，4度，过夜。

  • glass (2013-8-10 17:05:24)


    我用的是半干转，biorad的仪器。恒压20v20min转的是40-100kda的蛋白分子，效果还行。marker是顺利转过去了。目的蛋白显色曝光也不错。至于更小一点的分子10-20左右的就 15v15min，效果也不错。

    补充一点，我一直都是用millipore的0.45um的膜
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