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【求助】我的聚丙烯酰胺为什么不凝固
这两天想做SDS-PAGE,可是分离胶怎么也不凝固,做了几次都不凝固。七月中旬做的时候还是好好的。开始想是不是现在温度低了,今天放到30摄氏度试了试,还是不凝。我的过硫酸铵表面有点潮解板结,我把表面去掉,取了下层做了一下,发现30%的丙烯酰胺储存液直接加AP和TEMED可以凝固,但加上水或分离胶缓冲液等就不凝了。不知道什么原因,希望有经验的朋友赐教!【求助】我的聚丙烯酰胺为什么不凝固
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最新回复
INK (2013-8-30 12:55:32)
mysmdbl (2013-8-30 12:56:30)
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我用的是固体过硫酸铵,然后每次用现配的,分离胶用水泡和的正丁醇覆盖的,以前做的差不多40分钟到一个小时凝固,现在放一个晚上也不凝固。过硫酸铵过期或潮解影响大吗?我买的过硫酸铵上面也没想生产日期及有效期。
zhezhe (2013-8-30 12:57:24)
固体AP也很容易过期。换吧!
youyou99 (2013-8-30 12:57:41)
我也遇到过这种情况,最后也没弄明白为什么不凝,后来我只能多加一点TEMED了,对了,检查一下你的10%SDS,按照标准的方法重配一下。
BOSS2011 (2013-8-30 12:58:06)
zranqi_1 (2013-8-30 12:58:35)
可能是保存不等引起活性降低,试一下AP和TEMD用量都加倍,温度的话20度以上就没问题了,不一定要保证30℃。
PS:有个经验是所有药品冰箱冷藏可以保证质量,我的药品这样保存都是放了好几年照样做实验也不出异常,回想一下,现在这瓶AP和TEMED是03年购买的。。。
XYZQ (2013-8-30 12:59:22)
tuuu2 (2013-8-30 12:59:44)
我也遇到这样的问题,但到现在都没有弄明白
luoliqiong (2013-8-30 13:00:17)
AP过期了吧,或者你可以加大AP和TEMED的添加量。
pengke1983 (2013-8-30 13:00:39)
dongdongqiang (2013-8-30 13:00:56)
换AP吧,肯定是它的问题,其实不用现配现用,一次配多点,分装-20度保存,每次用取一小支,现在天气温度不算低用几周都没问题。
okhaha (2013-8-30 13:01:31)
肯定是你的AP有问题,决定胶凝固的只有AP和TEMED,而后者仅仅只是提供金属离子,关系到胶的软硬程度,前者才是控凝时间的关键,你可以加大AP量(没事的,只是缩短时间罢了,与胶浓度无关),当然最好重新买AP(你是肯定得重买,冬天你能怪温度,都丢30°了就只能说明是AP的原因了)
04906 (2013-8-30 13:01:48)
应该是过硫酸铵的问题,换一瓶吧,还有过硫酸铵溶液最好现配现用!
wanglaoshi (2013-8-30 13:02:10)
我的经验是仔细检查一下你的AP配制的浓度到底是不是对的?我曾经有一次配的稀了,怎么也不凝固。其实也不一定要现配先用。在四度放置,用一个星期不是问题。
mysmdbl (2013-8-30 13:02:29)
是AP的原因,我也出现过这样的情况,只是把AP换别的实验室的试了一下就好了,我再看我们实验室的AP固体确实有潮解!
windy+++ (2013-8-30 13:02:57)
windy+++ (2013-8-30 13:03:32)
前几天 借用别人的APS,胶凝的非常好,看来还是APS的问题。
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