【求助】蛋白透析如何减少蛋白析出？

最新回复

• BOSS2011 (2013-8-30 13:36:46)

  
  为什么用蒸馏水，可以考虑用PBS
  蛋白沉淀的原因很多，
  比如浓度，如果蛋白浓度很大，可以稀释一下
  溶液的PH值，根据你的蛋白性质，调节你的PH值

• eric930 (2013-8-30 13:37:08)

  
  In general, preciptate(ppt) is normal when you perform dialysis. Too many factors associated with PPT, it is protein structure question, pretty complicated.
  Anyway, you should tell people what kind of protein you try to dialysis at first, then the buffer is another issue. it is experiment under instruction of protein structure knowelage.

• 土豆potato (2013-8-30 13:38:02)

  之前我的结果跟你的一样，后来在先用PBS透24h，再用纯水透24h，只出现很少的沉淀

• 人小鬼大 (2013-8-30 13:38:22)

  那请问一下，PBS的PH是多少呢？

• H2O (2013-8-30 13:38:55)

  
  梯度透析，盐离子有助于蛋白稳定

• star#room (2013-8-30 13:39:14)

  
  盐浓度对蛋白质的活性还是比较关键的。
  我觉得你的解决方法可以从下面几个方面去考虑。
  第一加一些保护剂，如蔗糖，甘油，巯基乙醇等。
  第二，如果你仅仅为了脱盐的话，减少脱盐时间。考虑用超滤或者G系列的凝胶脱盐，这样时间较快，减少蛋白质的变性。
  第三，增加你的蛋白质浓度，一定程度也可以减少透析过程中蛋白质的沉淀，但是效果不是特别好的。你可以试试。

• uuooii (2013-8-30 13:39:33)

  增加蛋白浓度啊？为什么好多帖子多说要稀释蛋白浓度才好呢。。。

• star#room (2013-8-30 13:40:17)

  QUOTE:

  原帖由 uuooii 于 2013-8-30 13:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  增加蛋白浓度啊？为什么好多帖子多说要稀释蛋白浓度才好呢。。。

  用20mM的醋酸透析也能降低沉淀，可以试试

• star#room (2013-8-30 13:40:53)

  
  这个增加我考虑的是透析袋会有一定的蛋白吸附，当然只是针对蛋白浓度特别稀的情况，还有保持一定的蛋白浓度，蛋白自身也有一定的保护效果。我自己在做的时候一般都保持蛋白浓度在mg/ml量级上面。

• 079777chao (2013-8-30 13:41:11)

  我想请教 透析液PH值的问题？
  是不是透析液的PH值要远离纯化蛋白的PH值？有些迷惑

• ukonptp (2013-8-30 13:41:27)

  
  建议：
  1 可以采用梯度浓度透析，先采用与你纯化后蛋白盐浓度相近的透析液透析，4-8小时后换更小
  浓度的盐溶液透析，最后采用生理盐水或PBS（pH 7.4）透析.
  例如：用6M盐酸胍沉淀的目的蛋白，第一步透析可采用4M盐酸胍透析，4-8小时后采用2M盐酸
  胍透析，再之后可以使用PBS或生理盐水。
  2 透析液的pH值不要和目的蛋白的等电点接近，这样目的蛋白可能会更容易沉淀。

• greenbee (2013-8-30 13:42:24)

  透析过程中搅拌与否对形成沉淀也有影响。

• changlhsyo (2013-8-30 13:42:52)

  透析出现沉淀，不太同意楼上的说法。总有原因，不能说复杂就不管了。
  
  1. 蛋白本身不稳定。也就是说这种情况下跟透析没有关系，你就把他放在这个条件也会沉淀。这时要考虑优化pH，加一些additive等来稳定蛋白像楼上说的glycerol等。如果有free Cysteine的话DTT或者BME 等是不可少的。
  2. 透析前后条件变化太大。如果用蒸馏水肯定是不行的。蛋白永远要在buffer里面。另外离子浓度不能太低，否则蛋白容易沉淀。如果条件变化太大，对蛋白是一种shock，这个时候可以通过梯度透析来改善。
  3. 非常少见的情况但有的蛋白存在cold denaturation的现象。就是在常温没事，4C就沉淀。

• is2011 (2013-8-30 13:43:20)

  
  透析液的PH值一定要远离蛋白的等电点，可以用不同PH值的缓冲液分别小量的透析，析出的缓冲液的PH值应该就是蛋白的等电点附近，选择远离等电点的缓冲液即可。

• 人小鬼大 (2013-8-30 13:44:20)

  透析出现沉淀，不太同意楼上的说法。总有原因，不能说复杂就不管了。
  
  1. 蛋白本身不稳定。也就是说这种情况下跟透析没有关系，你就把他放在这个条件也会沉淀。这时要考虑优化pH，加一些additive等来稳定蛋白像楼上说的glycerol等。如果有free Cysteine的话DTT或者BME 等是不可少的。
  2. 透析前后条件变化太大。如果用蒸馏水肯定是不行的。蛋白永远要在buffer里面。另外离子浓度不能太低，否则蛋白容易沉淀。如果条件变化太大，对蛋白是一种shock，这个时候可以通过梯度透析来改善。
  3. 非常少见的情况但有的蛋白存在cold denaturation的现象。就是在常温没事，4C就沉淀。
  
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  我虽然没遇到过透析时蛋白沉淀的事情，倒是我的蛋白透析后粘呼呼的，有的人说是因为杂质类的东西中含糖，求证下是否如此。
  另外你说透析时离子浓度不能太低，否则蛋白容易沉淀，我困惑了。硫酸铵沉淀时不是高盐浓度时蛋白沉淀析出吗？你的这种说法应该如何理解呢？离子浓度和盐浓度是两个概念？