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【求助】请问一下怎样进行小分子量（10-30KD)的...

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-9-02 16:55    作者: biabiade    来源: 分析测试百科网

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【求助】请问一下怎样进行小分子量（10-30KD)的...

现在很无奈要诱导组蛋白，但是普通的电泳看不出来条带，老师建议用小分子量电泳方法自己查一下，时间比较紧迫，谁能帮个忙啊，多谢啦！！！
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  • loli (2013-9-02 16:55:46)


    用tricin-SDS PAGE,搜一下，很多资料的

  • biabiade (2013-9-02 16:56:13)


    不果目前的问题是，我跑的胶大部分蛋白（大肠杆菌裂解）都没怎么进入分离胶很深，可是溴酚蓝早就跑完了，这是什么问题啊？而且我要的小分子量蛋白也没看见，连MARKER都看不清条带

  • one (2013-9-02 16:56:52)


    check your page gel and your running buffer make sure all these are right

  • biabiade (2013-9-02 16:57:21)


    我们配胶的时候分离胶凝固时间比较长大概1小时多，之后才加的浓缩胶，是不是这样太慢了？

  • orangecake (2013-9-02 16:57:38)


    请把分离胶、电泳液配方列出来

  • tangxin_80 (2013-9-02 16:57:54)


    肽电泳一般要跑4-5个小时呢，看看你的分子量marker在不在？

  • vvmmoy (2013-9-02 16:58:14)


    你的短肽有多大？胶的配方？百分之几的胶？tricin胶一般都要聚合过夜的，大部分蛋白没跑进去，是因为分子量相对胶来说太大了，你可以在分离胶和浓缩胶之间配一层间隔胶，这样可以改善分辨率。

  • biabiade (2013-9-02 16:58:41)

    marker跑不出来，25KD之下什么都没了

  • biabiade (2013-9-02 16:59:35)

    我是按照NATURE那个protocol文献上配的胶啊，16%的，25KD以下什么都看不见了呀，MARKER也没有

  • biabiade (2013-9-02 17:00:27)


    我没有加SPACER

  • biabiade (2013-9-02 17:00:53)


    现在大的条带跑出来了，但是小的还是没有，70KD以上都相当清楚，50KD就模糊了，但是MARKER25KD以下就很粗糙了，下面全是模糊的分不出条带，上样量已经不小了，到底是怎么回事呢

  • biabiade (2013-9-02 17:01:47)


    请问一下SDS用几乘的比较合适呢？5×的
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