【求助】WB出现强烈的非目的条带

最新回复

• junjie05 (2013-9-02 17:05:33)

  
  我也有同样的问题 比我要的大 超清晰

• nn255 (2013-9-02 17:05:57)

  
  有的时候和抗体质量也有关系，特别是很多国产的抗体

• taoshengyijiu (2013-9-02 17:06:44)

  
  同样问题！比我要的大，做目的和内参都在同一位置出，而且超清晰！已经改变很多条件了，不知道什么原因，哪位高手给点意见？

• 3N4G (2013-9-02 17:07:13)

  无所谓的，反正自己需要的那个出来了
  再就是调节一下上样量

• plaa (2013-9-02 17:08:44)

  
  有可能是因为多克隆抗体，特异性不强。识别其他蛋白含量比较多的蛋白，所以非目的蛋白颜色就比较深。建议经费充足就换用进口抗体，或者单克隆抗体。如果经费不足，那就将就吧。

• flower-201 (2013-9-02 17:09:02)

  
  我来发表一下观点，仅供参考：
  Marker是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价偶联，便于观查，在不同的缓冲条件下，电泳时迁移特性可能会发生某些变化，导致一些偏差，不太适合精确定位蛋白，但也不会相差的太离谱，所以在标准上下是可以理解的。
  可以不用考虑多出的条带，分析结果时，只需剪下你所需的目的条带即可，结果是可信的。可能抗体的特异性不好。

• wood533 (2013-9-02 17:10:04)

  
  我以前做的时候是一抗孵育前，把膜对着marker剪下目的分子量，然后再一抗孵育，发觉目的条带要清晰多了。猜想以前整张膜都一抗孵育，肯定是目的抗体大多数与非特异性蛋白结合去了，导致的目的蛋白缺乏一抗结合。。。。

• lgm (2013-9-02 17:11:28)

  
  我也遇到了同样的问题，在离目的条带很远的位置，出现了一条很粗的带，目的条带反而没出，已经做了2次了都是同样的问题，很着急，抗体是进口的

• moonlight45 (2013-9-02 17:11:47)

  Western 唯一的优势就是可以区分分子量啊 很正常，有些抗体就是这样，跟做抗体时选的抗原表位有关。选的不好，就跟其他蛋白的表位交叉了。你敷抗体前将非特异性带剪掉在敷就是了。相差30kd很容易剪掉。要剪掉，否则会消耗你的抗体，让你用几次抗体效价就没了，而且抗体针对杂带的效价反而比目的的效价还要高，这让你的抗体损耗更大。

• 04906 (2013-9-02 17:12:56)

  楼上各位都分析的很有道理，如果离目标条带很远的杂带的话，可以容易分辨去除，如果很近，这种抗体对实验影响就很大了，建议不要用。
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