【求助】考染时水和一般脱色液哪个脱色更快？

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• 30moonriver (2013-10-09 11:22:35)

  应该是一般的脱色液较水脱色快的,用水脱色效果不大理想,一般不会只用水脱色吧
  
  脱久了不会把点/带脱掉,但要注意要换脱色液,且量要足够,否则甲醇挥发很快,胶容易干卷.把本底脱干净后可以把胶放水中较长久保存.且放久了也不影响条带清晰度,甚至效果更佳.
  
  染色液和脱色液重复次数不一定的,你可以根据他们的着染能力和脱色能力考虑是否换新的.夏季甲醇挥发快,用3~5次应该可以用.当然,用时要加盖.

• 2541 (2013-10-09 11:22:52)

  
  补充两点：
  1、胶一般应放20%的甘油中长久保存（见“分子克隆”）；
  2、染色液我们重复用了快2年了，效果还可以，只不过染色时间比新的要染长些，脱色液我们按Bio-Rad的配方配成高甲醇脱色液和低甲醇脱色液，前者可重复用2-3次，后者我们一般仅用1次。

• 2541 (2013-10-09 11:23:08)

  
  用盐水脱色更快哦

• 30moonriver (2013-10-09 11:23:31)

  
  其实,脱色时注意防止挥发,脱色液可以用活性碳处理后反复用多次的.

• 9900 (2013-10-09 11:24:07)

  QUOTE:

  原帖由 30moonriver 于 2013-10-9 11:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  应该是一般的脱色液较水脱色快的,用水脱色效果不大理想,一般不会只用水脱色吧
  
  脱久了不会把点/带脱掉,但要注意要换脱色液,且量要足够,否则甲醇挥发很快,胶容易干卷.把本底脱干净后可以把胶放水中较长久保存.且放久 ...

  我不同意你的部分观点：胶脱色不能脱的太久，虽然越脱越清楚，但脱的太久了，弱带就看不见了，胶也会变的失真，这样的胶照出的照片是很难被接受的。希望提醒各位注意。

• standup (2013-10-09 11:24:42)

  QUOTE:

  原帖由 30moonriver 于 2013-10-9 11:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  其实,脱色时注意防止挥发,脱色液可以用活性碳处理后反复用多次的.

  会不会雷同于“怕浪费一点醋买几斤螃蟹吃”
  活性炭贵不贵？

• standup (2013-10-09 11:25:04)

  QUOTE:

  原帖由 2541 于 2013-10-9 11:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  补充两点：
  1、胶一般应放20%的甘油中长久保存（见“分子克隆”）；
  2、染色液我们重复用了快2年了，效果还可以，只不过染色时间比新的要染长些，脱色液我们按Bio-Rad的配方配成高甲醇脱色液和低甲醇脱色液，前者可重复用2-3次，后者 ...

  能否给出Bio-Rad的配方？甲醇可以用乙醇替代吗？？如果不行，有什么区别？？
  谢谢！

• standup (2013-10-09 11:27:39)

  补充一点，2D凝胶，准备质谱。
  问上面问题的原因之一，是怕放到水里点没了，还要重新染。

• tuomu45 (2013-10-09 11:28:03)

  
  Methanol? I use 10% acetate 30min to destain. Results are good.

• DNA (2013-10-09 11:28:23)

  
  我们都是用乙醇和乙酸配脱色液，效果还可以。
  
  另外据说我们实验室曾经有人利用微波炉加热来大大缩短染色和脱色的时间，不过这个由于我没有亲自见过。不太了解。有谁知道，大家一起讨论

• wmp1234 (2013-10-09 11:28:42)

  
  我们也是用乙醇和乙酸配脱色液,然后加热脱色，很快的，可加热到马上要沸腾为止。不但脱色可以，染色也可加热，速度也很快，嘿嘿！

• cocacola (2013-10-09 11:29:02)

  
  我刚做的考染染色，脱色液配方是20%的甲醇和0.1M的tis-磷酸（PH6。5），先用tis-磷酸（PH6。5）漂洗2min，然后用20%的甲醇漂洗1min（最好不要超过1min），最后用20%的NH4SO4固定30min，
  
  注意考染不能长时间保存，尤其是在水里，3天颜色就容到水里了，毫无疑问，银染就不一样了，时间可以很长。
  
  不听老人言，吃亏在眼前。

• standup (2013-10-09 11:30:26)

  不听老人言，吃亏在眼前。
  
  呵呵，听了老人的一番指导，受益颇深。
  这下不会吃亏了。
  请问老人，染色时不是固定了吗？为什么还要20%的NH4SO4固定30min？
  哪里有卖进口的硫酸氨的？用国产的可以吗？

• memory (2013-10-09 11:30:45)

  
  我们的脱色液都是用乙醇和乙酸配的.甲醇有毒呀.用乙醇脱色的效果也很好.而且我们的脱色液是用活性炭吸附回收用,要不每次用都要配多麻烦呀.每次脱色时用量都挺大的.我们染色的时候是用微波炉加热的,很快的.脱色的时候就慢慢脱好了,一直到脱干净为止

• avi317 (2013-10-09 11:31:07)

  会不会雷同于“怕浪费一点醋买几斤螃蟹吃”
  活性炭贵不贵？
  
  我想不是你所说的那样吧！我们实验室有专门的人负责这些材料的购买的。问了一下，好象是20元左右/1000g（AR级的），用了一年半载的现在还有剩的呢。相比反复配置脱色液的时间，还有试剂的浪费，我觉得还是值得的。而且，活性炭可以反复用。如果你们实验室有的是钱，那也无所谓拉。

• avi317 (2013-10-09 11:31:24)

  我不同意Skyhawk的部分观点：胶脱色不能脱的太久，虽然越脱越清楚，但脱的太久了，弱带就看不见了，胶也会变的失真，这样的胶照出的照片是很难被接受的。希望提醒各位注意。
  
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  你说的很有道理啊，样品脱色恰倒好处是最好的。如果样品条带或点不是很浓，当然不可以脱太久，但如果你要拍照，最起码要保证底色脱完全，要不然照片效果也不会好的。

• 101010 (2013-10-09 11:31:44)

  
  我用水脱色试过，效果非常不好，建议不要用。
  
  甲醇可以用乙醇代替。
  
  以我的经验，脱色后的胶放在水里没有问题，我都放了半个多月了，还是非常的清晰，长期保存可以在水中加20%的甘油，这是分子克隆上写的。
  
  另外，染色和脱色都可以在微波炉中加热甚至煮沸，很省时间。但注意不要沸腾时间太长，容易把胶上煮出泡状的破损

• qhyu (2013-10-09 11:32:03)

  
  我做蛋白电泳考染及脱色为了提高速度，在45度左右的水浴中进行。染色时间可以只需几分钟（其间轻轻晃动一二次，整个胶变为较深的亮兰色即可）。脱色也在水浴中（约需15分钟），脱色液反复使用，用两三次后用活性炭“包被”的滤纸过滤，滤纸可反复使用。脱色液反复使用后，胶有点泛红，但不影响观察，如果要发表，建议用新配脱色液。如果你是急性子，可以试试。

• tie8 (2013-10-09 11:32:27)

  
  我一般用水脱色，一天换四次就差不多了，效果很好啊。