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【求助】请各位高手帮我分析一下为什么条带是这样？
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请各位高手帮我分析一下我这是什么情况
如图所示：这是我做出来的WB图片，目的蛋白分子是30KB，左侧的两个白点下面的是26分子量的位置，上面的是34的分子量的位置，一共有9个泳道，第五个泳道是加了正常细胞的蛋白（因为做的是组织杂带交多所以用细胞蛋白点了一个孔做阳性对照指示目的条带的位置），其他的泳道都是动物组织蛋白。我想问问两个白点之间的条带是不是就是我的目的条带？另外，如果是的话为什么条带是一条线呢，而且一点趋势都没有，请各为高手帮我分析分析啊。内参做出来没问题。一抗稀释比1:150（1:200,1:400都是白板)4度过夜，二抗稀释比1:5000室温1小时，5%脱脂奶粉室温封闭1小时12%的分离胶。
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最新回复
ukonptp (2013-10-11 11:08:41)
该效果太差，没法分析。
guagua (2013-10-11 11:09:07)
QUOTE:
连大概是什么原因导致的都不能分析吗？caihong (2013-10-11 11:09:27)
你用的是国产抗体吧？有时候原因就出在抗体上。。没办法。。
guagua (2013-10-11 11:09:47)
我用的是师姐去年留下的抗体，SANTA的，按她说今年9月份才过期，难道真的是抗体出了问题吗？
xiaoxiaoniao (2013-10-11 11:10:09)
试试用BSA封闭及稀释一抗
guagua (2013-10-11 11:10:40)
QUOTE:
我之前用过1:200、1:400都做不出条带来这个是我1:200的白板结果上面的是内参，下面什么都没有的是目的蛋白。51437662.jpg
xiaoxiaoniao (2013-10-11 11:11:03)
QUOTE:
目的蛋白是什么？可能表达弱
后者抗体没有特异性，不能识别
guagua (2013-10-11 11:11:25)
QUOTE:
目的蛋白是EGFL7,抗体用的是santa兔源的，组织是大鼠的肺组织PINK (2013-10-11 11:11:53)
QUOTE:
我曾经出现过一样的情况，用的是SANTA的一抗，后来换了抗体就出来条带了雪原 (2013-10-11 11:12:20)
QUOTE:
santa的？1：100至1：50试试吧
guagua (2013-10-11 11:12:52)
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请问你是也没出条带，还是出的结果跟我的第一张图片一样是一条直线？
PINK (2013-10-11 11:13:26)
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我的是没有条带，我觉得你的样本是没有问题的，应该是抗体的问题【求助】请各位高手帮我分析一下为什么条带是这样？