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荧光光度法测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（二）
关键词：有证标准物质 食品安全检测 农兽药残留分析 环境监测荧光光度法测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（二）
【结果计算】
NAG(U/L)=(FU﹣FB)/15× (3.3/1.5) ×20×(6/100)=(FB﹣FU) ×2.64
式中，15为酶促反应时间(分钟)，3．3为反应总体积(m1)，0．1为所用稀释样品体积(m1)，20为样品稀释倍数，6及100为6μmol/4-MU之荧光强度。
【参考区间】
测定条件不同对实验结果有影响，建议各实验室建立自己的参考值。
Kabak报道，健康成人血清NAG为7～20U／L，于嘉屏报道成人血清NAG为(9．94士2．07)U／L，魏有仁等报道尿。NAG为(6．39土3．19)U／gCre或为(0．723土0．361)U／μmol。
【临床意义】
尿NAG活性增高是肾小管损伤的较灵敏指标；增高见于急慢性肾炎、肾小管间质性肾炎、休克引起的肾功能衰竭、肾病综合征、流行性出血热、中毒性肾病。肾病恢复期或肾实质病变严重时，增高不明显。下泌尿系统感染和尿路结石时，尿NAG可正常。移植患者尿NAG测定可早期发现排斥反应，一般临床在出现各种指征前1～3天即有尿NAG活性增高。尿NAG活性还可用于重金属等肾毒性物质环境污染的人群筛查，以及职业病调查等。
【注意事项】
1．血清中NAG于4℃稳定数小时至数天，-20℃可稳定数月。尿标本置4℃可稳定l周。
2．BSA应无NAG，若含有，可于50℃加热灭活。
3．配制试剂所用的蒸馏水应选择重蒸馏水，底物应无游离的4-甲基伞形酮，若有可用丙酮抽提去除。
4．除服用能产生荧光的蛋白外，一般标本可不做标本空白。
【评价与思考】
1．N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷可被两种酶催化水解，一种是N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3．2．1．30)，另一种是N-乙酰-β-D-氨基己糖苷酶(EC3．2．1．52)。国内外文献中常称的NAG，严格地说是所用底物命名，而不是指酶对底物特异性。目前国外文献中常泛指β-N-乙酰-氨基己糖苷酶。
2．NAG的分析方法主要有荧光分光光度法、色原性底物法。荧光分光光度法可选用4-甲基伞形酮-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷作底物，灵敏度高，但需荧光分光光度计。色原性底物有多种，PNP-NAG法以对硝基酚-N-乙酰-β-D．氨基葡萄糖苷作底物，游离的对硝基酚在碱性条件下显黄色，在405rim波长测定，需设置标本空白，以消除尿中尿色素的干扰。其他方法还有利用问甲基磺酞乙酰氨基葡萄糖苷(MCP)、2-氯-4-硝基苯乙酰氨基葡萄糖苷为底物。
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