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【求助】还是蛋白超滤的问题
【求助】还是蛋白超滤的问题
我之前没有用超滤的方法浓缩过蛋白质，实验室也没有前辈做过，所以完全停留在理论阶段，希望各位大虾能给一些实质性的指导：
1、超滤一般浓缩的比例是多少？还是说可以随心所欲地浓缩？
2、超滤的滤膜和蛋白大小有什么要求？
3、超滤是否只需要购买超滤管，没有其他特殊仪器和试剂要求？
4、使用超滤的方法是否会存在蛋白的损耗，比如会有蛋白残留在滤膜上，如果有损耗，是不是这种方法就不适合与定量分析比较试验？
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最新回复
911 (2013-10-27 10:03:37)
回答第二个问题：如果蛋白是滤过的话，所选膜孔径应该是蛋白分子量的5-10倍，如果蛋白要截留，那么所选膜孔径应该是蛋白分子量的1/3-1/5。
wanglaoshi (2013-10-27 10:04:00)
截留和滤过分别用于什么样的试验呢？我是想要浓缩蛋白，那么应该用截留是吧？
cbou876 (2013-10-27 10:04:24)
超滤浓缩的比例与你的试验样品有关系，浓度过高会导致蛋白的稳定性降低，产生聚体。一般对于重组生物制品来讲超滤的蛋白终浓度在4-6mg/ml。
wanglaoshi (2013-10-27 10:04:48)
追加一个问题，在不知道原蛋白液中蛋白含量的情况下用超滤的方法浓缩的时候，同一根超滤管是否能反复使用，如果反复使用会不会影响定量实验的结果
sr9971 (2013-10-27 10:07:19)
这个是不能用于定量实验的，蛋白会因为粘附在膜上而损耗
wanglaoshi (2013-10-27 10:08:05)
啊！！那还有什么办法可以在不损耗蛋白的情况下浓缩呢，原液当中的蛋白含量过低用westernblot无法检测出来
杨过爱大米 (2013-10-27 10:08:37)
这个量也太低了点，wb也看不见。浓缩方法都会有些损耗，只要在可以接受的范围内就行，除了超滤，还有蔗糖、peg之类的浓缩。
biabiade (2013-10-27 10:09:03)
超滤应该都有损失吧
guagua (2013-10-27 10:14:53)
相对于PEG等浓缩来说
超滤的损耗应该是比较小的
lorri (2013-10-27 10:16:55)
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