查看完整版本请点击这里：
【求助】配15%的胶像买彩票，有木有有木有？
【求助】配15%的胶像买彩票，有木有有木有？
接触western blot快三个月了，一直在捣鼓小分子量的蛋白，什么十几K的二十几K的。15%的胶也配了估摸有有几十板吧，可没有哪一次配完胶敢拍着胸脯说，嗯，这次的肯定没问题。一切真相都要等到曝光完了才明了，排除那种跑着电泳就看到marker冲你笑的情形。
搜过园子里很多帖子，关于配胶要注意的事项无非以下几点：
1.玻璃板要干净。
2.分离胶液体混匀要充分。
3.对于15%的，积层胶的长度可适当增加。
一一自我剖析，每次配胶都会检查玻璃板，如有不干净的，一定会重新洗，洗完用DDH2O冲一遍，晾干后再用。关于液体的混匀，我自认为每次都混匀了，当然这一步很难量化。长度问题是很好控制的，这个好解决。
那究竟问题在哪儿呢？其他浓度的都没这么纠结，12%，10%，8%的都蛮好，弄得现在配15%的胶都有心理阴影了。
查看完整版本请点击这里：
【求助】配15%的胶像买彩票，有木有有木有？
【求助】配15%的胶像买彩票，有木有有木有？
最新回复
wmp1234 (2013-10-29 17:08:55)
LZ 我一直在配15%的胶，感觉还是很正常呀，发出来的条带也可以。没有什么特殊的地方呀，你的问题主要是什么呀，说来听听？
tie8 (2013-10-29 17:09:15)
你们的什么试剂或者配方有问题吧，15%的胶哪有这么难配？
yjf1026 (2013-10-29 17:09:38)
Invitrogen 有卖配好的胶的吧，要是有钱，可以用他们配好的
fklo83 (2013-10-29 17:10:09)
===========================================================================================================
15%的胶曝光出来的条带常呈波浪状，有时整体条带尚好，但某一两个泳道出来的条带呈Ω状，总体来说跟其他浓度出来的条带相比，没那么平整，不知道自己在配胶过程中哪步出了问题，请指教一下哈
fklo83 (2013-10-29 17:10:28)
=======================================================================================
我们一直用的下面这个配方，帮忙看下：
5ml
水 1.1ml
丙烯酰胺 2.5ml
1.5M Tris 1.3ml
10%SDS 0.05ml
10%AP 0.05ml
TEMED 0.002ml
用水封胶，有时也用正丁醇封胶，用正丁醇时好像出来条带不好的情况少些，会不会是我用水封胶的手法或方法不对呢？
youyou99 (2013-10-29 17:10:48)
木有木有，从来木有，建议楼主找个配的好的人，直接用人家的系统配一次。确定是不是试剂因素。
101010 (2013-10-29 17:13:09)
5ml
水 1.1ml
丙烯酰胺 2.5ml
1.5M Tris 1.3ml
10%SDS 0.05ml
10%AP 0.05ml
TEMED 0.002ml
用水封胶，有时也用正丁醇封胶，用正丁醇时好像出来条带不好的情况少些，会不会是我用水封胶的手法或方法不对呢？
======================================================================================================
配方应该没有问题，有可能是跑胶的问题，倒入缓冲液后尽量把胶板下面的气泡赶干净，跑的时候电压不要太大，积层胶50v，分离胶100v。
lixi559 (2013-10-29 17:13:30)
15的胶有神马难度的呀
rxcc33 (2013-10-29 17:13:54)
yueban-1147 (2013-10-29 17:14:17)
让分离胶凝固时间长一些看看，我一般凝固1个小时。感觉还不错。
6327555 (2013-10-29 17:15:05)
zzzz (2013-10-29 17:15:24)
tudou85 (2013-10-29 17:15:44)
【求助】配15%的胶像买彩票，有木有有木有？