【求助】请教蛋白质的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

最新回复

• 987789 (2013-10-29 17:17:09)

  1. 胶浓度为多少？因为你的分子量很大，8%的胶浓度较合适。
  2.点样时加个marker，可以检测胶制备是否有问题。
  3. 你用什么染色方法？银染方法比较灵敏，如果蛋白是一种酶，且可使某种底物显色的话，可以用活性染色试试，更灵敏。

• 雪花子 (2013-10-29 17:17:39)

  
  太感谢了，我用的是6%的分离胶，5%的浓缩胶，考马斯亮蓝染色，因为我现在做page是为了对蛋白作质谱分析，他们要求我这样染色的。我应该用多大的电压跑，跑多长时间合适呢，我做过2小时，3小时 4小时 5小时都没有出来。

• 雪花子 (2013-10-29 17:17:58)

  我查过很多公司的蛋白质MARKER 都是用作SDS-PAGE的，是不是也同样可以用于NAIVE-PAGE呢，上样之前样品是怎么准备的，是不是只要和loading buffer混在一起就可以了？

• fei1226com (2013-10-29 17:18:22)

  有专门做native gel的maker，不能混用吧。
  电泳时是4度电泳，loading buffer也不应该有还原剂，
  不知道有用否

• 雪花子 (2013-10-29 17:18:42)

  
  谢谢，请问你知道哪家公司有作这种电泳的marker吗？

• XYZQ (2013-10-29 17:19:01)

  
  我用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大豆GS同工酶，我想知道活性染色是怎么回事，一般配方是什么？谢谢！

• plaa (2013-10-29 17:19:28)

  你可以上网查查，上海生工，phamacia。。。
  作蛋白都应该有native maker。

• plaa (2013-10-29 17:19:50)

  
  我觉得你5％的浓缩胶好像太大，是不是根本没有进浓缩胶，你把整个胶同时染，下胶的时候不要去掉上层胶再染色

• @STAR@ (2013-10-29 17:20:08)

  
  还有你的marker跑得没有问题吗？

• damingxia0904 (2013-10-29 17:20:32)

  你的蛋白的等电点是多少啊？选择对吗？

• 00无名指00 (2013-10-29 17:20:52)

  
  500kda的大蛋白要用5%琼脂糖来跑，聚丙烯酰胺的孔径太小了，电荷量也不足，当然跑不进去