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【求助】蛋白印迹分析 内参蛋白 beta-actin
请教WB的各位同仁,前辈,【求助】蛋白印迹分析 内参蛋白 beta-actin
刚开始学做western, 内参蛋白用的是beta-actin,可是检测出来的条带一直都是在50-75kda之间,beta-actin的分子量一般在41,2kda左右,有人知道原因么?
研究室其他人也用同样的抗体没有问题,不知道自己哪步出问题了
样品用的是骨骼肌,另外为了确认beta-actin, 在检测目的蛋白前先测了beta-actin, 结果一样
实在找不出原因了,有知道原因的麻烦分享一下,感激不尽
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最新回复
8princess8 (2013-10-31 17:38:55)
是不是beta-actin一抗给错了?
给的是beta-tubulin?
3648755 (2013-10-31 17:39:53)
后来重新做了一次,这次选了GAPDH的单抗,37附近的条带是出来了,但是同时在50-75一间也出现了一条带
98776langtao (2013-10-31 17:41:12)
beta-actin不适合用于骨骼肌
49888 (2013-10-31 17:41:43)
非特异的杂带?
3648755 (2013-10-31 17:46:38)
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为什么呢?我之前也确实看到过这样的经验总结,和我老师说来找,但是原因是什么我不知道
3648755 (2013-10-31 17:55:59)
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不知道,难道是二抗的问题?
nvdabing (2013-10-31 17:56:20)
我做WB的时候发现,很多蛋白和Marker指示的位置并不是完全对应的,我的β-actin条带位置也高于42KD,而且重复很多次结果都是一样的,其实WB并不像RT-PCR那样容易出现非特异性条带,毕竟是抗原抗体的特异性反应,所以应该是目的条带
xue258 (2013-10-31 17:56:47)
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我也想知道为什么,能否说的详细点或是给出相关文献啊?
mamamiya (2013-10-31 17:57:28)
和组织不同有关系,也和抗体有关系,我原来用两种不同公司的actin做出两种不同的结果,
【求助】蛋白印迹分析 内参蛋白 beta-actin