【求助】western blot PVDF 膜有正反吗？

最新回复

• vvmmoy (2013-10-31 21:09:36)

  没有的，转膜后，因一面有蛋白，另一面没有，所以就有正反之分了。可以在论坛里搜索下。

• DNA (2013-10-31 21:09:57)

  
  我认为是有正反的。
  如果仔细观察，PVDF膜的一面较光滑，而另一面较粗糙，就像过滤除菌用的滤膜一样。

• finger (2013-10-31 21:10:26)

  
  没有,实验室做western blot 无数,从来没有人看过反正,也从来没因此有过问题.

• DNA (2013-10-31 21:10:53)

  QUOTE:

  原帖由 finger 于 2013-10-31 21:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  没有,实验室做western blot 无数,从来没有人看过反正,也从来没因此有过问题.

  是呀 哦也是做试验无数 突然师妹问这问题 仔细一看果然膜两面不一样
  说明书未提及有差异 看来真的无所谓正反
  谢谢诸位的讨论

• moonlight45 (2013-10-31 21:11:15)

  
  膜两面是不一样的,不过,我全试过,都没问题,呵呵

• tie8 (2013-10-31 21:11:37)

  这个问题还真牛 我可没想到 不过 每次做都没问题,没出现转不进的现象.
  下次 瞧瞧

• zhy平平 (2013-10-31 21:12:06)

  个人认为模式没有正反的，但凸面和胶相接触容易排尽胶和膜之间的气泡，同时，转膜后也不存在反正的问题，因为膜是有一定孔径的，转膜后，蛋白并不是简单沾在膜上，而是嵌入膜中了，所以，膜的两侧都有蛋白，并且，我在作的时候也的确是这样。

• 98776langtao (2013-10-31 21:12:54)

  
  我用的PVDF膜，操作中没有出错，可就是转不上，Marker大部分跑到膜下的滤纸上了。有人说是膜放反了。到底怎么回事？很困惑。

• duoduo (2013-10-31 21:13:14)

  
  是不是短路了？

• loli (2013-10-31 21:13:37)

  
  我都是将凹面朝胶,作为正面,这样加抗体时就方便了.

• luoliqiong (2013-10-31 21:14:01)

  
  我用的amersham的PVDF膜,它的protocol上说没有正反,两面都可以是一样的

• yes4 (2013-10-31 21:14:22)

  
  一般不会转不上的,可能一抗有问题,至于MARKER在 滤纸上,有可能你的膜剪得太小.

• dreaming (2013-10-31 21:14:44)

  
  转膜的时候膜应该是膜正极,胶在负极,你是不是弄反了?才会出现转不上去的情况

• fox_79 (2013-10-31 21:15:09)

  我做过实验的，没有正反的，我用的是millipore的PVDF膜.

• damingxia0904 (2013-10-31 21:15:28)

  
  搞清楚正反极，另外注意优化转膜的时间以及电压！

• she (2013-10-31 21:15:51)

  
  我买的是凌飞的PVDF膜，它的确有正反。你在日光灯下观察，比较反光的一面是正面，转膜时要紧贴着胶的。另一面比较粗糙，在膜没有放入转印液前，是可以肉眼辨别出来的。

• PPT (2013-10-31 21:16:13)

  PVDF膜或者NC膜都是有正反面的，但是对实验是没有影响的，尽可以放心使用。

• 小游abc (2013-10-31 21:16:35)

  
  有正反面，不过我两面都用过，都没问题。个人认为转膜后就要区分与胶接触的一面与另一面，有时候在发光压片的时候，把背胶的一面朝上，就压不条带，或者条带很弱。 我一般都在甲醇泡pvdf膜之前，在膜的一角用铅笔做标记，转膜时标记的背面与胶接触。

• BUK (2013-10-31 21:17:05)

  
  会不会转过了，蛋白跑过膜，所以到了滤纸上了？

• leifengta (2013-10-31 21:17:28)

  没有正反之分的，只不过在转膜以后要注意区分蛋白面和非蛋白面了。