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荧光偏振免疫法测定全血环孢素(一)
关键词:荧光偏振免疫法测定全血环孢素(一)
[size=10.5pt]一级标准物质 [size=10.5pt]农药标准品 [size=10.5pt]有机标准样品 [size=10.5pt]中药对照品
【实验原理】
荧光偏振免疫分析(fluorescence polarization immunoassay，FPIA)是荧光素标记的抗原与标本中的抗原竞争结合特异性抗体，反应后用单一平面偏振的光源照射，荧光素被激发产生偏振荧光。偏振荧光的强度与荧光物质受激发的分子转动的速度成反比，与荧光分子大小成正比，即标记抗原与抗体的复合物分子量大旋转较慢，发出的偏振荧光强；游离标记抗原的分子量小旋转快，其偏振荧光弱。因此不需进行结合和游离成分分离即可进行测量。
FPIA的试剂为荧光素标记的药物的抗体，模式为均相竞争法，标本中的药物和荧光标记的药物与一定量的抗体竞争结合。反应平衡后，与抗体结合的荧光标记药物的量与标本
中药物的浓度成反比。由于抗体的分子量远大于药物的分子量，游离的荧光标记的药物与结合抗体的荧光标记药物所产生的偏振荧光强度相差甚远，因此在FPIA中测定的偏振荧光强度与标本中的药物的浓度成反比。在高浓度药物中，因荧光标记结合物少而出现低偏振值，在低浓度药物中，因荧光标记结合物多呈高偏振值。通过仪器本身的电路及电脑软件系统将此关系精确地换算为全血药物浓度，再由终端显示并打印出来。-201-
【试剂与器材】
1．全血单克隆环孢素试剂，贮存于2~8℃，其组成为：
S：全血环孢素单克隆抗体(小鼠抗体)溶液，抗体浓度<25％，总体积3ml。
T：全血环孢素荧光示踪剂溶液，荧光示踪剂浓度<0.01％，溶液中含表面活性剂和蛋白稳定剂，总体积3ml。
P：预处理溶液，含表面活性剂，总体积3ml。
2．附加试剂，可存放于15~30℃。
(1)全血沉淀剂：硫酸锌的甲醇溶液(35m1)
(2)探针洗涤液：乙烯基乙二醇(35m1)。
(3)溶解剂：表面活性剂(5m1)。
3．全血单克隆环孢素定标液6瓶。
A瓶10ml；B～F瓶均为4ml。A～F瓶的环孢素浓度分别为0.0ng／ml、100ng／ml、250ng／ml、500ng／ml、1000ng／ml、1500ng／ml，贮存于2~8℃。
4·全血单克隆环孢素质控液
3瓶，每瓶3ml。L(低)、M(中)和H(高)瓶质控的环孢素测定值应分别在120．00~1 80．00ng／ml、340．00~460．00ng／ml和680．00~920．00ng／ml之间，贮存于2~8℃。
5．荧光偏振自动分析仪。
农药标准品: http://www.rmhot.com/plist_1/plist_1_13_0_1.html
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