荧光偏振免疫法测定全血环孢素(二)

关键词: 一级标准物质
农药标准品
有机标准样品
中药对照品

【操作步骤】
    1．全血样品的采集一般在清晨服用环孢素前0．5小时采血lml于风干肝素抗凝管中。
    2．精确吸取150µl样品于离心管中，每个样品使用一个新的吸头，即使复管的同一样品也不能重复使用吸头。
    3．沿离心管管壁依次准确加入50µl溶解剂和300µl沉淀剂，盖管。用涡旋混匀器混匀10秒，确保彻底混匀。
  4．9500g(最好换算成r／min)，离心5分钟。
  5．将上清液转移到反应杯的样品孔中，要确保上清在150µl以上，开机操作。
  6．质控和定标品从冰箱取出后需待温度到15~30℃才可处理，取样前小心混匀，不可混出气泡。
    7．按仪器操作说明书设置测定有关参数，装好试剂并进行测定，根据标准品的测定值仪器会自动绘制校正曲线，样品测定结果仪器自动给出。

【结果计算】

仪器会自动计算出全血环孢素的浓度，单位为ng／ml。
【临床意义】

环孢素是常用的免疫抑制剂，为环孢菌培养基中提取的高脂溶性肽类大分子。通过下调IL-2及其受体的表达，选择性抑制Th细胞的增殖、活化，以及减少干扰素产生等机制，发挥免疫调节作用。广泛用于器官移植后的抗排斥，及多种自身免疫性疾病的治疗。该药虽无其他免疫抑制剂的骨髓抑制等毒性作用，但仍存在肝、肾损害、震颤、高血压、多毛等不良反应。环孢素治疗浓度范围窄，生物利用度个体差异大，药动学复杂，其与剂量相关的毒
副反应与排异反应不易区别，且影响环孢素全血浓度的因素较多，涉及吸收、分布、转化、排泄等方面。因此监测环孢素的血药浓度，对临床合理、安全、有效地使用环孢素具有重要意义。

【注意事项】
    1．标准品、质控品需按测定样品的同样操作步骤进行测定，而且测定前应先放在室温平衡，加试剂后应轻轻混匀，不要激烈振荡，以免产生气泡影响结果。如产生气泡，应将其放置至气泡消失。
    2．每星期需冲洗仪器的探针，按照仪器操作说明使用试剂盒附加的探针洗涤液进行洗涤。
    3．在使用新批号的试剂盒、新缓冲液、仪器进行了校正程序等情况下应重新定标。
    4．每天、每周和每月均应按仪器要求执行质控。

【评价与思考】

目前检测环孢素血药浓度的方法有RIA法、HPLC法和FPIA法。RJA法优点为应用简易，可快速测定较大数目的血标本，但测定值偏高，有放射性污染和核素衰变等缺陷。HPLC法优点是特异性高，其缺点是分析样品时间长，仪器复杂，需要特殊技术训练。FPIA法优点：精密度、准确度、灵敏度均较好，试剂长效、稳定性强，仪器稳定、分析快捷，操作简便。特别适用于大型医院或移植中心实验室使用。

影响血药浓度的因素有：①药物相互作用：同时使用大环内酯类、氨基糖苷类、磺胺、两性霉素、酮康唑等化疗药，可干扰环孢素消除，升高血药浓度。而苯妥因、利福平等肝药酶诱导剂则降低环孢素的血药浓度。②肝、肾、心脏功能状况：肝、肾、心移植前、移植后不同功能恢复期，以及在长期用药过程中影响体内过程的任一环节发生改变，都将导致血药浓度变化。
有机标准样品:http://www.rmhot.com/plist_1/plist_1_14_0_1.html