查看完整版本请点击这里:
【求助】蛋白质测序转PVDF膜的问题
【求助】蛋白质测序转PVDF膜的问题
我的蛋白分子量在20KD左右,跑Tricine--sds-PAGE(1.5mm gel)电泳后转PVDF膜,预染Marker都在膜上,按理说应该没有把样品转出去,可是用考马斯亮染就是染不出样品,Marker到能染上。请较各位前辈,这会是什么原因造成的?急。。。。在线等待
查看完整版本请点击这里:
【求助】蛋白质测序转PVDF膜的问题
【求助】蛋白质测序转PVDF膜的问题
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-11-08 16:01 作者: 8princess8 来源: 分析测试百科网
最新回复
babybabe (2013-11-08 16:02:48)
uuooii (2013-11-08 16:05:48)
PVDF膜是多大孔径的?20KD左右得很容易穿过0.45um膜的
8princess8 (2013-11-08 16:06:27)
=============================================================
SDS--PAGE电泳跑过,效果不好,才选用小分子胶来分析。小分子胶不好转吗???
8princess8 (2013-11-08 16:08:52)
===========================================================================
我用的是0.45um膜,今天试试0.22um的看行不行。150MA 2小时这个条件应该不会把蛋白转出去吧?
bring (2013-11-08 16:09:16)
应该150MA 45分钟到1小时
8princess8 (2013-11-08 16:18:09)
QUOTE:
我试了下这个条件,样品没转上。这个蛋白真的好折腾人。ero11 (2013-11-08 16:19:19)
能够保证转印的过程低温呢?比如拿个盆,放一些水,再放几个冰袋,再把转印仪放在水里。
我记得以前用的转印仪程序设置是,恒流110 mA,电压大概是70 V。时间是45 min----1 h。
BUK (2013-11-08 16:20:56)
yychen (2013-11-08 16:21:16)
8princess8 (2013-11-08 16:22:53)
==============================================
已经做出来了,就是膜的问题。谢谢各位给我提供宝贵的意见。
【求助】蛋白质测序转PVDF膜的问题