【求助】关于印迹膜再生液的使用

最新回复

• newway (2013-11-09 20:56:10)

  楼主杂交那步的时候怎么就不行了？
  
  另外what is 膜再生液？是让膜上蛋白恢复活性的？恢复抗原性的？还是洗掉抗体用的？我估计是最后一种吧，如果你没有发出条带来，说明没有抗体结合，如果不是膜已经干了，就不用什么再生，直接重做没有关系。

• 兔纸 (2013-11-09 20:56:32)

  电泳和转膜都非常成功，从杂交开始不好的意思是说一抗二抗浓度控制不好，所以不想不停的跑电泳，只需要好好调抗体浓度就行，
  
  再生液在western 好像目前只有一个功能的吧，还有蛋白恢复活性的么？

• mingming0638 (2013-11-09 20:57:19)

  
  我们用的再生液好象主要成分是Tris 18.15g + SDS 3.03g + 巯基乙醇 配成500ml，
  使用时候在50度下温育30分钟，效果非常好。
  
  我是膜再生后染actin ，条带非常清晰，原来的抗体都洗掉了。有张膜再生了两次，都还不错。

• 兔纸 (2013-11-09 20:58:01)

  能否把你们的具体配方告诉我们啊，呵呵
  
  另外：您能跟我们讲讲stripe洗膜的原理么?是仅仅洗掉二抗么？还是连一抗也洗掉了？
  做western 如果不用stripe洗膜，第一个抗体杂交完毕后，PBST直接洗完后杂交第二个抗体行不行呢？
  
  非常感谢

• greenbee (2013-11-09 20:58:56)

  
  hello，为什么不是用0.8M的NAOH洗膜呢？bigman的配方第一次见呢，好用吗蛋白不会洗掉啊？

• newway (2013-11-09 20:59:52)

  
  等我看看，挺好用的。蛋白还在，但肯定是少了一些，但用来染actin应该问题不大。

• newway (2013-11-09 21:01:46)

  
  一抗应该是掉了，蛋白可能也少了一些。

• jingling845 (2013-11-09 21:02:13)

  
  实验室是直接买的膜再生液，30min洗膜，然后重新杂交~

• 了了 (2013-11-09 21:05:47)

  
  用30%双氧水也可以呢，在蛋白面加个2ml左右，37°10Min，处理一次绝对没问题，但具体能重复这样操几次就不清楚了

• HP007 (2013-11-09 21:06:09)

  
  我们用的再生液好象主要成分是Tris 18.15g + SDS 3.03g + 巯基乙醇 配成500ml，
  使用时候在50度下温育30分钟，效果非常好。
  
  请问巯基乙醇的量是多少?