【求助】包涵体用尿素溶解后可直接用GST beads纯化吗

最新回复

• gogo (2013-11-09 23:29:46)

  QUOTE:

  原帖由 Darcy 于 2013-11-9 23:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  我用BL21表达GST融合蛋白，形成了包涵体，可用8M尿素溶解，但请问溶解后可直接用GST beads结合纯化吗？

  不可以

• Darcy (2013-11-09 23:32:05)

  QUOTE:

  原帖由 gogo 于 2013-11-9 23:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  不可以

  那先应该怎样处理啊

• ALALA (2013-11-09 23:32:25)

  
  可以先做蛋白复性，然后再过柱，但是复性成功率很低；也可以摸索表达条件，比如说表达温度、IPTG浓度，但是据经验都是隔靴搔痒；比较有效的方法是重新克隆、换载体，如果条件允许换成HIS标签的，即使是包涵体表达也可以过镍柱纯化。

• remonte (2013-11-09 23:32:44)

  
  打个最简单的比方，两斤毛线织成毛衣后，可以穿在身上，有领有袖，可以搪风，那么直接把两斤毛线挂在身上会是什么效果呢？呵呵。
  
  GST融合蛋白被 8M 尿素 处理后，已处于变性状态，GST（谷胱甘肽转移酶，毛衣） 空间结构被严重破坏，成了一段多肽链 (2斤毛线)，已经失去了与 glutathione 结合的能力。
  
  如果想挂柱，有两个方法：
  
  1 蛋白质复性。
  2 改变表达条件，使之形成可溶性表达。（买件新毛衣）

• Darcy (2013-11-09 23:33:07)

  
  那么请问可以用SDS溶解后直接用GST beads结合纯化吗？
  还有，我的蛋白是用来制多抗的。

• guagua (2013-11-09 23:33:26)

  在得到具备正确折叠的三级结构的 GST 之前，不要再考虑GST亲和层析挂柱。
  
  SDS 也不能使包涵体内的蛋白质正确折叠。

• NBA (2013-11-09 23:34:11)

  
  同意楼上的，制备多抗的话包涵体就可以，园子里关于包涵体制备多抗很多人问过，搜搜看。

• zhihui小新 (2013-11-09 23:37:24)

  如果加上GST还是不溶的话可以换His标签，加尿素之后直接过镍柱然后复性就好了