【求助】跪问：胰岛素的western blot

最新回复

• yes4 (2013-11-10 20:53:48)

  
  转膜时间一般60-90分钟，电压100伏，我一般100伏电泳60分钟
  蛋白能很好的转到膜上。

• damingxia0904 (2013-11-10 20:54:20)

  
  谢谢，如果用恒流泥，我用的是invitrogen公司的转膜仪，用这个条件也可以吗？

• damingxia0904 (2013-11-10 20:54:52)

  
  胰岛素分子量只有5700，很小的，请各位多多指教

• damingxia0904 (2013-11-10 20:55:54)

  
  胰岛素分子量只有5700，很小的，请各位多多指教

• ha111 (2013-11-10 20:56:16)

  电流1mA-2mA/cm2，我们通常100mA/膜，按照目的蛋白分子大小、胶浓度选择转移时间，具体可以根据实际适当调整。
  目的蛋白分子大小(kDa)  胶浓度  转移时间Cool
  80---140  8%  1.5-2.0
  25---80  10  1.5
  15--40  12  0.75
  <20  15  0.5

• damingxia0904 (2013-11-10 20:56:41)

  
  我转了２０分钟，可是膜上没有，胶上也没有，是不是转过了？谢谢

• veiwu (2013-11-10 20:57:04)

  
  我觉得你可以转膜梯度，自己摸索时间。比如20 30 40 50 60分钟，
  膜可以小点，别浪费，一次多跑几个样品，然后分几次转膜，那样的话
  既可以摸索条件，也可以减少跑胶

• hot_hot_hot (2013-11-10 20:57:31)

  
  我转过，不超过500ma，2个小时左右 ，用半干转膜仪

• yes4 (2013-11-10 20:57:52)

  我做的胰岛素，分子量大概在10kd左右，用的15%的胶，100V,转一个小时，效果很好