【求助】caspase-3 western blot

最新回复

• 7437654 (2013-11-10 21:12:40)

  
  caspase－3的cleaved条带没出来可能性比较多.
  
  1.可能caspase-3根本没激活.
  2.可能你的抗体不对头.不知你买哪家的,象CST都写着这个抗体是针对procaspase还是cleaved caspase.
  3.可能浓度不够,所以太淡.问题也可能出在二抗、ECL、显影液等
  
  个人感觉santa的caspase－3似乎质量稳定性不是特别好。
  如果western做不出来，可以试试一些荧光试剂盒

• feima+ (2013-11-10 21:13:04)

  和楼主一样，用santa的做不出来
  
  现在换了cst的，还没出结果

• lagua123 (2013-11-10 21:13:23)

  
  谢谢回复！我的32KD条带是出来了的，而且也有明显剂量以来关系，药物处理组比对照要淡的多，但cleaved条带就是没有！郁闷啊！如果说caspase3未激活，那怎么处理组条带淡很多呢？蛋白上养量是一样的啊，即便定量不准确，也不会差别那么大吧！

• 子衿青青 (2013-11-10 21:14:44)

  caspase3的抗体哪的最好出阿

• vcve (2013-11-10 21:15:07)

  
  blocking buffer 你用什么? 还有一抗稀释液你用什么?我用了1%BSA 溶液,我做cleaved 条带是出来了

• lagua123 (2013-11-10 21:15:32)

  
  我block用的5％脱脂奶粉（in TBS/T），一抗稀释也是这个。还有个问题，收细胞的时候，上清中的漂浮细胞是不是也要收起来，一起提取蛋白？

• gemei0115 (2013-11-10 21:16:00)

  
  你们都买的哪里的抗体呀？我买的是博士德德结过什么都没有。我做肝组织的，免疫组化表达怎么再细胞核呀 ，拿到是非特异性的？我用双氧水和山羊血清。封闭了两次很郁闷。请大家指教。

• any333 (2013-11-10 21:16:35)

  
  请问楼主的caspase 3抗体怎样啊？32kd和cleaved 条带都能出来么？

• yychen (2013-11-10 21:18:08)

  你们都买的哪里的抗体呀？我买的是博士德德结过什么都没有。我做肝组织的，免疫组化表达怎么再细胞核呀 ，拿到是非特异性的？我用双氧水和山羊血清。封闭了两次很郁闷。请大家指教。
  
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  我买的是Epitomics公司的，用的效果还不错。

• lorri (2013-11-10 21:18:47)

  我block用的5％脱脂奶粉（in TBS/T），一抗稀释也是这个。还有个问题，收细胞的时候，上清中的漂浮细胞是不是也要收起来，一起提取蛋白？
  
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  应该是把漂浮的细胞液收集起来吧？请问现在已经能做出好的结果了吗？最近本人也在做caspase3,活化片段也没有出来。12%的分离胶，电泳低压80,20分钟，高压120 ，80分钟，转膜80fu,60分钟，这样的条件重复过几次都没有压出小片段来，用丽春红将膜染色结果显示只到34KD左右有条带，在考虑是电泳时间不够？还是转膜时间太长？这种情况该怎样调整？本人新手，请大家指教。

• gmjghh (2013-11-10 21:20:09)

  
  我用的cst的，还可以。开始做时，能看到cleaved ,y样品用过几次，就不见了，可能是反复冻融降解掉了。可以重新制样做一下，祝ok