【求助】请教PMSF的加入方法

最新回复

• gogo (2013-11-10 21:21:39)

  QUOTE:

  原帖由 bs4665 于 2013-11-10 21:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
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  各位战友：
  向大家请教一下请教PMSF的加入方法。PMSF不太好溶，我尝试了只有用无水乙醇能够完全溶解，但无水乙醇加入裂解液中后对蛋白质的影响不知道可不可以忽略；有人直接称量后加入PMSF的固体粉剂，但称量起 ...

  有些东西可以看看分子克隆呀，异丙醇是不错的溶剂，试试看吧

• BUK (2013-11-10 21:21:59)

  看分子克隆，没错。配成10mM or100mM终浓度1mM.

• dhpbj (2013-11-10 21:22:19)

  
  异丙醇溶解配制成10mg/ml的浓度；
  工作浓度为17-174ug/ml（0.1-1.0mmol/L）；
  注意PMSF在水溶液中不稳定，须在每一步的分离纯化步骤中加入新鲜的PMSF。

• orangecake (2013-11-10 21:22:43)

  
  我们实验室是用DMSO (二甲基亚砜)配成100mmol/l。

• bs4665 (2013-11-10 21:23:40)

  
  我试过的，用异丙醇仍然不好溶，稀释很多倍仍有结晶析出。多谢各位战友的提议，看来可以用DMSO试试，多谢michael11 ！

• ROSE李 (2013-11-10 21:23:57)

  在裂解液中直接挑针头大小的PMSF就可以啦，我们实验室就是这样做的，效果蛮好

• bs4665 (2013-11-10 21:24:24)

  QUOTE:

  原帖由 ROSE李 于 2013-11-10 21:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  在裂解液中直接挑针头大小的PMSF就可以啦，我们实验室就是这样做的，效果蛮好

  
  请问是多大体积的裂解液中，说详细点好吗？

• uuooii (2013-11-10 21:24:54)

  
  请教一下大家，大家加PMSF有没有出现过白色沉淀？会是什么原因呢？温度低？还是把蛋白沉降了？

• ssonglikihi (2013-11-10 21:25:46)

  在裂解液中直接挑针头大小的PMSF就可以啦，我们实验室就是这样做的，效果蛮好
  
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  关键你是挑了后，PMSF不溶啊 ，这样也能有用吗

• 12xunmei (2013-11-10 21:26:14)

  
  请教各位，我的PMSF母液100mM，由于反应体系较小，想把PMSF稀释再加入，稀释后出现沉淀，请问正常吗？如果不正常，应该怎么办？我第一次用PMSF，还望指教，谢谢！