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【讨论帖】摸转膜时间是个很费时间的事情,建议...
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摸转膜时间是个很费时间的事情 建议大家贴出自己所做蛋白的分子量和时间以供后来者参考
如 p53基因 长度 53 100A 60mins
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字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-11-12 21:06 作者: zbboom 来源: 分析测试百科网
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superboy (2013-11-12 21:07:32)
histone and HP1 10-30kD 90min 200mA
gst-set8 50-100kD 120min 200mA
hyuu (2013-11-12 21:08:18)
GAPDH 分子量 40左右,200ma,2h
zbboom (2013-11-12 21:08:43)
我发现 大家都可以用到 200ma ,
b-actin 43kd 100ma 1h
nn255 (2013-11-12 21:09:50)
主要是湿转和半干转条件本身就不同吧。大家应该注明自己是湿转还是半干转这样才有参考价值。
湿转, 40kd 200mA 1h45'or 180mA 3h
110kd 200mA 2h30'
49888 (2013-11-12 21:11:05)
260KD,300mA 2h
zhihui小新 (2013-11-12 21:33:34)
2、半干转(恒流):时间30min,电流根据有效转膜面积调整,即电流=2.5mA*有效转膜面积,计算后所得的值稍微减去一些:减去0-5mA(面积小的话就少减一些,面积大的话就多减去一些)
本人所用的是BIO-RAD的仪器,做的分子量范围12-170,在同一块10%的胶上同时转过20和130的分子,6%-15%的胶转膜效率也均较高
fox_79 (2013-11-12 21:34:01)
17kd-170kd, iBlot Dry Blotting system, invitrogen, 8-10min
xueyouzhang (2013-11-12 21:34:22)
50KD左右
250mA 1h
coolcool (2013-11-12 21:34:52)
湿转
27Kda-110Kda
100V,60min.
remonte (2013-11-12 21:35:10)
楼主的提议太棒了.
我希望知道120KD的湿转条件!!谢谢
我分享一下自己的实验体会:40-70KD 40v 3h
转得很好
sunnyB (2013-11-12 21:37:56)
半干转 伯乐
110kd 25v 30分钟
kuohao17 (2013-11-12 21:38:44)
湿转 Biorad
40-120 KD
300V,1h
dongdongqiang (2013-11-12 21:40:16)
本人所用的是BIO-RAD的仪器,湿转。做的分子量范围32-170,在同一块10%的胶上同时转过32、42、100、160kDa的分子,转膜时间是4小时,有时候转两个小时100的也很亮。有时候虽然做出的条带很亮,但是考马思亮蓝染胶后 仍然可以看到目的条带,有时候还相当清楚,所以我有个疑问,这样做出来的图片可靠吗?!
dongdongqiang (2013-11-12 21:40:41)
QUOTE:
忘了说条件了。0.35A,恒流转的gogo (2013-11-12 21:43:34)
GAPDH 湿转 100V 2h
taoshengyijiu (2013-11-12 21:43:52)
大家能否 给我个建议,关于转分子量54,140KD湿转恒压的条件。谢了!
ritou1985 (2013-11-12 21:44:12)
我用bio-rad mini型,50左右的很好转,380ma 35min,但是19-26的用这个条件不稳定,同样的条件有时候做不出来,求教原因
kswl870 (2013-11-12 21:45:18)
湿转,200mA,1h30min,0.45um的PVDF膜,大小蛋白通吃(十几kd的也很好),或100V,1h,一样,注意尽量低温转膜。另外看到楼上有说转膜后考染还是有条带,那也很正常,不可能一点不剩吧,结果当然可信的
mingming0638 (2013-11-12 21:47:13)
结果是marker红线以上的透到滤纸上了,下面小分子量的还好。
101010 (2013-11-12 21:47:32)
湿转: 80kd 恒压 350mA 1H
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