【求助】Western Blotting 两种抗体一起孵育

最新回复

• junhun (2013-11-15 11:45:52)

  
  简单，两种办法皆可：
  1，strip （尽量用这个）
  2，共同孵育。 前提是彼此条带无干扰（你能分得清），来源必须相同。

• www.1 (2013-11-15 11:47:33)

  
  怎样才能做到彼此条带无干扰呢？ 我是把两种抗体加在一起的啊！种属来源应该就没啥问题吧？

• H2O (2013-11-15 11:47:49)

  
  劝你还是选择做stripping吧，这个相对简单。

• bs4665 (2013-11-15 11:48:08)

  
  Stripping 看似麻烦，实际上避免很多问题，结果不好时好分析

• www.1 (2013-11-15 11:48:28)

  
  Stripping是什么意思啊？分开孵吗？

• ritou1985 (2013-11-15 11:48:56)

  请问各位高手，我能在一张膜上同时孵育两种抗体吗？因为我的目的蛋白和内参相差不是很远，做了好多次都没有好结果，我在想是不是切胶时没有切好，所以我想试一下不切胶，整块转膜，然后同时孵育抗体。请问这样行吗？如果行的话，抗体怎么配制呢？是不是在一定体积的抗体稀释液中加入两种抗体呢？ 两种抗体的来源有什么要求吗？都是同种属来源的行吧？ 谢谢各位！
  
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  well, it is very important to avoid mixing two different antibodies together.
  Personally, I hate stripping as well.
  My suggestions will be :
  you can 1. ponceau stain your membrane after transfer and cut your membrane according to the protein bands
  or2. probe with your protein of interest first, then directly probe with you loading control again. No stripping needed, because your target protein is not overlapping with the loading control. No worries.
  Either way worked for me.

• wawa (2013-11-15 11:50:34)

  
  我以前这样做过， 可以同时孵育，两个抗体的来源种属没有特殊要求，如果不同就是在二抗的时候分别加入对应的二抗就可以了。

• 8princess8 (2013-11-15 16:17:43)

  
  我以前这样做过， 可以同时孵育，两个抗体的来源种属没有特殊要求，如果不同就是在二抗的时候分别加入对应的二抗就可以了。

• ladyhuahua (2013-11-15 16:18:28)

  劝你还是选择做stripping吧，这个相对简单。
  
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  求stripping protocol....
  我strip以后要么就是strip不干净,要么就是膜上的蛋白全洗掉...

• www.1 (2013-11-15 16:18:54)

  上次我试了一下两种抗体同时孵，结果只出现了一条带(内参)，但目的没出来。丽春红染色也是一样的，可能是我的目的蛋白量太少了吧！请大家继续分享自己的经验，谢谢！

• c86v (2013-11-15 16:19:22)

  
  可以的，我一直都是两个抗体放在一起孵育的。背景也不怎么有。条带还是比较满意的。