【求助】谁能帮我看看这张双向电泳图的问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-11-21 17:34 作者: dreaming 来源: 分析测试百科网

我用的程序是200 30min ,500 30min ,4000v 3 hour,4000 25000vhour
我的胶条是13cm的3-10的。跑了好长时间才发现这个程序是7cm胶条推荐的程序。请问大家，如果我用7000v的聚焦电压，图的质量会改善吗？我应该设置怎样的程序

dreaming (2013-11-21 17:38:09)

上图~~~~~~~~~~~

45438908.snap.jpg
8princess8 (2013-11-21 17:38:55)

蛋白点好少啊，应该不是电泳程序的问题吧
dreaming (2013-11-21 17:41:02)

我做的是细菌的分泌蛋白，蛋白数目本来就少。我想试试7000伏聚焦，可是不知道vhr用多少
DNA (2013-11-21 17:41:34)

一般达到40，000伏小时就可以了。

有个问题请教下，你的分泌蛋白是怎么浓缩提纯的呀，我的浓度都好小。。。
dreaming (2013-11-21 17:42:03)

的分泌蛋白是用100%TCA溶液浓缩的，然后用预冷的丙酮洗三次。浓度还行，500ml的菌量可以跑16次，13cm的胶条。你是怎么提的？
u76mp (2013-11-21 17:42:24)

从图上看，应该还可以，聚焦程序没什么问题，分泌蛋白含量是比较少的，不过由于你的蛋白比较居中，建议可以采用4-7的胶条，效果会更好，另外，想请问一下，100%的TCA是怎么配的？100gTCA 溶于100ml水？100%TCA溶液浓缩怎么操作？100%TCA溶液和菌液的比例是多少？
dreaming (2013-11-21 17:42:47)

100%TCA是100g加100ml水，按细菌培养液上清体积的六分之一加就可以，4度静止1-3小时，蛋白就沉淀下来了
kuohao17 (2013-11-21 17:43:19)

我觉得总伏时数到了就都差不多了。3-10的伏时数达32000以上就可以了。
雪原 (2013-11-21 17:43:47)

我觉得就是你蛋白加少了.