查看完整版本请点击这里:
【求助】酶活性有但条带无,怎么回事?
小弟从细菌上清中提取了一种半胱氨酸酶,作用于特异底物后,活性很明显;但是用这种酶跑SDS-PAGE的时候却怎么也不出条带,我之前测了下蛋白浓度是0.6ug/ul,上样我全都是最大量(1.0的板上30ul左右),各种方法都试过了就是没有条带,希望大侠予以指导啊【求助】酶活性有但条带无,怎么回事?
查看完整版本请点击这里:
【求助】酶活性有但条带无,怎么回事?
【求助】酶活性有但条带无,怎么回事?
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-11-21 17:48 作者: @STAR@ 来源: 分析测试百科网
最新回复
eve_49 (2013-11-21 17:48:47)
utt0989 (2013-11-21 17:49:06)
0.6ug/ul里面是总蛋白的浓度吧,那你提取的样品会不会有其他很多杂蛋白?不排除里面大部分是杂蛋白,目的蛋白就很少咯,建议换一种更加灵敏的染色方法看看。
remenb (2013-11-21 17:49:25)
30moonriver (2013-11-21 17:49:46)
我觉得是不是你作用于特定底物本身反应就很灵敏,而当你跑SDS-PAGE的时候,很多情况是反应不如原来那样的明显?
@STAR@ (2013-11-21 17:50:09)
谢谢各位大侠,我再补充下信息吧:酶大约50kd,MARKER SM 0671,10%分离胶;之前跑胶的话MARKER都是很漂亮的。之前考虑过银染,但老板考虑还是先用考马做。对于楼上战友所说的浓缩,不知具体方法是什么?简单查了下,常用的真空冷冻干燥我们这边做不了~谢谢!
one (2013-11-21 17:50:31)
我们这边浓缩一般用超滤管,或是透析袋+PEG
newway (2013-11-21 17:50:52)
浓缩办法有多种:
一种是用透析袋,在50%甘油buffer里透析,甘油还有稳定没活性的作用。
一种是装在透析袋里,外面用聚乙二醇,不过透析袋的分子孔径要小于聚乙二醇的分子量,如用3000的透析待。
qqq111 (2013-11-21 17:51:13)
你的目的蛋白在总蛋白中的比例太小了,可以尝试用tag后纯化做,否则文章都不好发啊
greenbee (2013-11-21 17:51:42)
QUOTE:
试一试wb.【求助】酶活性有但条带无,怎么回事?