【求助】】请教：二向仪器上下槽相通，还能用吗？

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• wsll (2013-11-23 17:51:04)

  
  1、上下槽相通没什么太大问题，可以都配成一X的电泳液。
  通常情况下是下等1X，上层用2X的电泳液，一般是不会通的，至于你的相通的原因,分析有二：一是模具没装好，需要按照相对应的地方装好。二是下层的电泳液需要和上层的持平，就是在电泳槽外缘加1X电泳液的高度和二乘的高度一样，否则会产生压力差，所以很容易渗透下去。
  跑胶时间可以跑的长些 没问题的，给你一个参考：S1:2.5W 30min S2:15W 至溴酚蓝至最下沿（一般六个小时左右）。
  2、根据你说的你的蛋白分布应该就在ph4-7的范围之内，所以碱端没什么东西，长胶条的聚焦答应一般为8000V比较合适，最高10000，大于5000V也可以接受，一般聚焦80000vhr。
  有什么问题可以继续交流~

• PCR (2013-11-23 17:51:34)

  那个装置上槽底端共有七个空道，正中间一个空道稍宽，是卡塑料电极板，最两边的两个空道是我卡玻璃板的的（中间有我灌的胶）。在往中间的四个空道我按老师所说，卡的是厚塑料板。我反复拆卸了，在外面试着装液，发现水是从这些空道和板子之间流下去的，我怀疑是不是仪器老化，卡的不紧密造成。这样能不能配成上层2X，下层1X的缓冲液啊？我觉得上下缓冲液不同浓度会使二向快一点，我的实在是太慢了。
  
  而且您跟我建议的二向条件，S2的功率没有变化，会不会还是要跑到10个小时去了...我在离学校比较远的地方做实验，晚上已经在那里过过一次夜了，结果也不好。。
  
  另外再麻烦前辈一个问题，我跑两块胶就需要将二向设置的功率，电压或者电流翻倍啊？
  谢谢谢谢！！

• wsll (2013-11-23 17:52:18)

  
  是的 ，我提供的是一块胶的功率，但如果是恒压的话就不需要加倍了。还有电泳没必要等的，如果你是上午跑的话电压加到280v左右或者功率在15W/块胶的话一般五六个小时就差不多了，
  如果是较晚跑的话，你可以恒压80-120v过夜跑也没问题的，不需要等的
  仪器老化可能会导致这种情况，但没问题，都可以用1X的

• PCR (2013-11-23 17:52:48)

  好的。谢谢你啊！我这几次都是用恒功率跑的，下次试试用恒电压。如果是恒压的话，是不是不用分成两步了，从开始就一直用80-120V跑，5-6个小时就可以结束啊？
  
  我刚接触双向，比较弱...再次麻烦前辈了。。

• wsll (2013-11-23 17:53:11)

  不是的 80v低压使蛋白过度到二相胶，半个小时左右；后面用280v跑应该就可以了

• BUK (2013-11-23 17:53:29)

  用琼脂糖封一下上槽的边不就不漏了嘛

• PCR (2013-11-23 17:53:54)

  下次我用这个恒电压的条件试一试。

• PCR (2013-11-23 17:54:25)

  
  太聪明了，这招真没想到。。不过上槽的边边比较多，估计有点麻烦。但是很值得一试。

• remenb (2013-11-23 17:54:48)

  是灌胶的时候两边的胶会缩小，所以上面的缓冲液会从哪个缝隙漏下来

• JK.jon (2013-11-23 17:55:08)

  
  那设置的是功率，如果跑两块胶的话，功率也要加倍吗？

• wsll (2013-11-23 17:55:31)

  
  功率需要加倍的，因为每块胶都并联在一起的，P=v(i1+i2+...)

• JK.jon (2013-11-23 17:56:01)

  我现在也遇到了这个跑二向跑的慢的问题，需要十几个小时，我用的也是Ettan Daltsix ,参数设置是Step1: 5W,Step2:17W,我现在不知道是什么原因导致跑的这么慢，请问楼上这位，你后来跑的怎么样，时间缩短了吗？

• 33号 (2013-11-23 17:56:30)

  
  我跑时上槽2x的液体也漏下来了，漏下来使下槽的液体体积超过最高水位就电压自动升高，电流下降，导致功率上不去，胶跑了六七个小时，根本不动。后来把隔板和胶板都卸下来，把上槽盒压上灌了水才发现是一块胶盒的两块儿玻璃板没有对齐导致上槽液渗漏，后来找不下多余的挡板，跑了一半的胶直接废了，悲催了！