【求助】请教有经验人士：有关毕赤酵母

最新回复

• ilovegaga (2013-11-24 12:28:11)

  
  4、我做的摇瓶表达量比报道的低2～3倍，请帮忙找一下可能的原因？
  
  由于刚刚起步，需向大侠请教，望不吝赐教!
  
  多谢！

• cocacola (2013-11-24 13:41:15)

  
  1.据文献称，此现象难以避免，解决方案：一是生长阶段的PH值定在5.0，可以少生成成淀，此条件并不影响酵母的生长，二是此后发酵过程可以补加。
  
  2.菌种经过夜培养后，OD 0.7左右，10％接种量。
  
  3.76小时（初加甲醇算）。

• bling (2013-11-24 13:41:39)

  
  你的基础盐培养基在ph大于6的时候出现大量沉淀，那你可以在菌体生长阶段将培养基ph控制在5左右，对菌体生长没有影响。
  至于诱导时间，取决于表达产物。可以间断地1取样，进行检测。即使是同一种产物，由于每次发酵条件的微小变化，诱导时间也会有一定的差异。

• ilovegaga (2013-11-24 13:42:17)

  我看的资料一般是OD2-6，5％接种量，是YPD转BMGY。
  至于BMGY转BMMY，或者说基本培养基转诱导培养基就不确定，我试了一下，是20ml基本盐培养基菌液离心菌体转至40ml诱导培养基与40ml转40ml好像没什么差别，只是40ml的菌浓高些而已。
  我看到过有人是1：1（v/v）
  
  至于什么时候基本转诱导，按原理是等基本盐里面的甘油全部耗尽，有报道说培养36h，但也只是一家之言，所以不确定，特请教！

• iii_ii (2013-11-24 13:42:47)

  至于什么时候基本转诱导，按原理是等基本盐里面的甘油全部耗尽，有报道说培养36h，但也只是一家之言，所以不确定，特请教！
  
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  互相交流，互相提高，请教就不敢当了。
  关于pichia酵母上大罐发酵这块，我实践的也不多，能帮上的忙实在有限。
  
  实验室在开始做大罐发酵的时候，也是根据文献和以往大肠杆菌发酵的经验的基础上开始的，条件也都是自己摸索出来的。
  发酵罐等试验技术条件以及人员操作上的各种因素都是变化的，很难说别人的经验就能完全照搬，就能适合自己的情况。
  
  在这方面，还要请高手指点了！
  BTW：看下PM。

• qhyu (2013-11-24 13:45:25)

  一般在甘油耗尽后，要让酵母饥饿一段时间，时间的长短取决于是增强型还是缓慢型；使酵母的酶系有一个适应过程。

• feima+ (2013-11-24 21:12:09)

  
  大罐发酵更简单了，C源耗干时DO会上升的（我是说用无机盐培养基哦）。此时可流加葡萄糖或甘油。或饥饿培养30到60 分钟后诱导。用BMGY培养，可依pH流加，C耗尽时pH会上升。

• qhyu (2013-11-24 21:14:29)

  
  做摇瓶用BYPD/BYPM即可，发酵罐同理！无机盐培养基灭菌后接种前用氨水调PH到5.0不会有沉淀，此时不影响生长！摇瓶诱导2~4天。