【求助】17kd小蛋白转膜条件……（湿转）

字体: 小中大 | 打印发表于: 2013-11-24 22:03 作者: cwcwcww 来源: 分析测试百科网

小弟用bio-rad转膜槽，PVdF膜，转1个17kd的小蛋白，用过400mA，10min；300mA，40min。2个条件转过，ecl显色效果均未见条带，抗体santa，abmart，2家的换过，电泳转膜液均不超过3次，求教各位战友，怎么总不出啊，内参每次出的都挺好，目的蛋白总看不到………………要疯了……

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【求助】17kd小蛋白转膜条件……（湿转）

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birdfish (2013-11-24 22:06:21)

可以加大上样量看看呢
bling (2013-11-24 22:06:40)

没试过恒流转，我做15KD的蛋白用的是50V 45min，一抗4度孵育过夜，出来条带还不错，供你参考
cwcwcww (2013-11-24 22:07:36)

可以加大上样量看看呢

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功能蛋白，考虑过这个问题，感谢……
njkph (2013-11-24 22:07:56)

转膜：17KD,湿转，恒压100v，一个小时
pou (2013-11-24 22:09:22)

我的半干转，恒流，2.5*膜面积，40min
zhihui小新 (2013-11-24 22:09:42)

我的蛋白也是17kD。恒流300mA，.75胶70min；1.5的90min。
cwcwcww (2013-11-24 22:11:38)

我的半干转，恒流，2.5*膜面积，40min

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实验室限制只能湿转~不过还是很感谢~
131415 (2013-11-24 22:12:54)

20Kd的蛋白 PVDF膜，国产Tanon的转印仪

200mA，40min 就能转上，是不是你的抗体出问题了，做个dot-blot试试？
cwcwcww (2013-11-24 22:15:22)

QUOTE:
原帖由 131415 于 2013-11-24 22:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

20Kd的蛋白 PVDF膜，国产Tanon的转印仪

200mA，40min 就能转上，是不是你的抗体出问题了，做个dot-blot试试？
抗体换了好几家了，abcam的santa的什么的都用过，应该不是抗体问题，我怀疑是蛋白量问题，谢谢条件！我试试！