【求助】帮忙看看几张非变性胶的图

最新回复

• orangecake (2013-11-27 17:32:14)

  
  没做过. 走变性胶的目的是什么呀.

• wmp1234 (2013-11-27 17:32:36)

  
  目的是为了检验蛋白质的氧化还原状态。如果跑出来条带了，可以用过氧化氢或者DTT处理，看看氧化还原状态的差别

• lxh031 (2013-11-27 17:33:06)

  非变性蛋白电泳和目的蛋白的等电点很有关联的，lz目的蛋白等电点是多少阿？是碱性蛋白还是酸性蛋白阿？因此，跑天然条件下的PAGE就要注意酸性条件或碱性条件下的情况！ 对了，lz电泳所用溶液有没有出现问题阿？

• 49888 (2013-11-27 17:33:30)

  
  你可以试试用sds page的胶，但是样品处理loading buffer不加巯基乙醇或者DDT，不煮，上样跑试试看

• wmp1234 (2013-11-27 17:34:49)

  非变性蛋白电泳和目的蛋白的等电点很有关联的，lz目的蛋白等电点是多少阿？是碱性蛋白还是酸性蛋白阿？因此，跑天然条件下的PAGE就要注意酸性条件或碱性条件下的情况！ 对了，lz电泳所用溶液有没有出现问题阿？
  
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  我跑的是GST蛋白，他是酸性蛋白，因为我看文献上人家跑GST的时候，pH一般用的是8.3。

• wsll (2013-11-27 17:35:12)

  
  走非变性胶的目的是为了进一步目的蛋白的生物活性检测；
  
  看LZ的结果像是蛋白发生降解了，既然已经冰上跑了，那就尽量把电泳时间缩短，另外loading buffer最好也要用非变性的；
  
  PH=9时候貌似有好转，可以再试几个PH，蛋白量好像也有些大了，适当降低些；
  
  祝好运！

• vivian4123 (2013-11-27 17:35:32)

  
  楼主的教大概是8%浓度的胶，你的蛋白分子量是多少？如果比较小50KD以下，最好把胶浓度加大，另外加入浓缩胶，而且我认为跑的时间过长，加大
  电压，缩短时间，你既然是在冰上电泳，可以加大点电压的，希望对你有帮助，我一般遇到拖尾都先从这两方面入手。

• moonlight45 (2013-11-27 17:36:46)

  
  有可能是你处理样的方法不对，如果将跑SDS-PAGE的样在PAGE胶上，就会出现这种情况

• 831226 (2013-11-27 17:37:44)

  
  通过还原胶可以判断出你的目的蛋白并不是单一的，可能是表达的时候糖基化水平不同而呈现系列分布，这样的话你目的蛋白也是一系列，他们有不同的PI，这种情况你跑非变性胶是很难呈现单一的条带的---本身就不是单一的蛋白。你可以跑个等电聚焦来验证你的蛋白是不是有多个PI。

• is2011 (2013-11-27 17:38:04)

  不知道楼主的问题解决没！我最近跑蛋白也也遇到了类似的问题，希望可以找到答案！谢谢！