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【求助】蛋白表达后总在沉淀

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2013-12-05 14:59    作者: TAT    来源: 分析测试百科网

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【求助】蛋白表达后总在沉淀

俺是新手，最近用PCMV的载体在真核细胞中表达目的蛋白，可无论用293T还是Hela细胞，western检测发现目的蛋白总在沉淀中，在上清中根本检测不到，接下来根本无法做免疫共沉淀实验啊……所以想向各位大侠请教，有什么好的经验或方法可以在不破坏蛋白之间相互作用的前提下，让目的蛋白表达在上清中呢？？？
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最新回复

  • lxh031 (2013-12-05 15:00:01)

    你是指在裂解buffer上清吧？那就更换裂解buffer吧。没有有效裂解？还是盐浓度过高？真核表达的蛋白在真核细胞内的调控机制下，不易形成沉淀的。

  • redbutterfly (2013-12-05 15:00:33)

    QUOTE:

    原帖由 TAT 于 2013-12-5 14:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    俺是新手，最近用PCMV的载体在真核细胞中表达目的蛋白，可无论用293T还是Hela细胞，western检测发现目的蛋白总在沉淀中，在上清中根本检测不到，接下来根本无法做免疫共沉淀实验啊……所以想向各位大侠请教，有什么好的经验或方 ...
    可不可以改换一个表达载体。

  • avi317 (2013-12-05 15:00:52)


    也有的蛋白是因为半衰期短。加个蛋白酶体抑制剂试试。

  • fox_79 (2013-12-05 15:01:10)

    改变一下诱导条件，比如温度、盐浓度等

  • 49888 (2013-12-05 15:01:33)


    可能表达的蛋白疏水性比较强
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