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【求助】凝胶过滤预装柱堵了 怎么办?
Hiprep sephacryl s-100HR 预装柱,16/60,分完胞内蛋白后发现流速减半,就用0.2M的NaOH以0.5ml/min的速度清洗,结果流速越来越慢,在冲了近50ml的NaoH后,流速只剩下一分钟两滴了!现正用水冲,流速还是一分钟两滴,增大泵速也增不了流速,还有,刚用碱冲的时候发现柱头出现了黄色,后来黄色区域扩增到距柱上端约10cm处,下面颜色一直正常,我想是不是0.2M的氢氧化钠反而使蛋白沉淀堵柱了?是不是得用胃蛋白酶处理?怎么能使流速上去呢?这么低的流速,怎么处理都很难啊【求助】凝胶过滤预装柱堵了 怎么办?
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最新回复
H2O (2013-12-06 15:24:21)
碱黏度大,稍微有点堵如果还能流降低点流速,只要通的就用水多洗洗,然后参考说明书再用有机溶剂洗,实在没办法那就把柱子倒过来洗或反方向洗。
DDD (2013-12-06 15:25:14)
DDD (2013-12-06 15:29:18)
我冲三天三夜了,柱子里黄色的污染物在缓慢下移,流速越来越慢了,现在已经是六分钟一滴了,倒过来冲又怕前功尽弃,毕竟污染物已明显向下移动了一截。
另外,最近一直在做凝胶过滤,无论胞内还是胞外蛋白用s-100都能分出四五个峰,但一跑sds-page发现,后几个峰里仍然有大分子量的蛋白出现,是分子形状或疏水性的影响吗?我还想知道,是流速大时得到的峰浓度大还是流速小时的峰浓度大?
ladyhuahua (2013-12-06 15:30:03)
你说的那种情况,通常是你的样品太杂了,凝胶过滤是不能把它们分开的
DDD (2013-12-06 15:31:30)
DONT (2013-12-06 15:32:08)
晕死,再冲半个月,也太有耐心了吧。最好直接买跟新的
DDD (2013-12-06 15:32:30)
我决定把预装柱拆了
DDD (2013-12-06 15:34:22)
杂蛋白太多的时候凝胶过滤是不能起到很好作用的,清洗最好倒过来冲
DDD (2013-12-06 15:34:38)
非常感谢大家的回复,之所以倒冲好是不是因为柱头最脏,倒冲污染物会很快出来恢复流速?
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