【求助】WB拖尾现象

最新回复

• hold住 (2013-12-06 16:33:20)

  提好的蛋白按比例混好后100度煮沸5分钟后 放于-20保存 过一天后上样跑胶 浓缩胶 及分离胶都不能成一条线 严重的拖尾！！什么原因？？这么解决啊？？？有人说是样品溶解不好，是那个途径致溶解不好？？这么解决？？谢谢！！

  
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• 04906 (2013-12-06 16:34:02)

  
  上样量多少啊？看着上样量有些大，
  
  或者是样品里盐离子太多。上样时间太长后才电泳！
  
  希望能帮到你

• hold住 (2013-12-06 16:35:32)

  
  回楼上 我上样15ul，含50ug蛋白。这样跑出来的胶砖模后用丽春红染色后 膜上条带很淡啊 ，曝光后全是背景色 ，有点黑有点脏的感觉。目的有的孔有， 但很淡。有的孔没有。什么原因啊？？

• yonger (2013-12-06 16:36:15)

  
  这个不是拖尾，我们跑高浓度的胶（>12%）也有这种情况：浓缩胶中样品能够压到呈 一条线，但在样品进入分离胶后条带前方溴酚蓝呈弥散状，但最后的wb结果没有问题。原因不明。
  你说的浓缩胶也不能压成一条线大概是上样过大或浓缩胶长度不够吧。
  丽春红染色本来灵敏度就低，条带很淡正常；
  背景高有点脏这个原因很多，比如没封闭好或过度封闭，一抗二抗浓度过高，抗体非特异性，没洗干净等，你要看下脏的地方在不在用到里面 看是不是样品有关，我们就遇到过有些组织样品确实很“脏”的；
  另外，转膜buffer不新鲜也能造成，先考虑这些吧。

• taoshengyijiu (2013-12-06 16:36:51)

  觉得好像是loading buffer 中的pH改变了

• redbutterfly (2013-12-06 16:37:12)

  
  我觉得是电泳buffer的问题，建议重新配制

• duoduo (2013-12-06 16:37:43)

  
  楼主童鞋，你先检查检查你的基层胶配置是不是过短。如果基层胶配置过短，那么整个压线的功能就丧失了。

• 831226 (2013-12-06 16:38:28)

  
  看预染的MAKER跑的还是很整齐的，所以一点问题都没有。绝对的不影响转膜WB。
  
  如果实在不放心，跑完后考染，看条带是不是平整

• 49888 (2013-12-06 16:38:53)

  我的经常有这样的现象的，好像结果还好～