【求助】求抗体稀释浓度

最新回复

• tuomu45 (2013-12-07 15:53:37)

  QUOTE:

  原帖由 蓝蜗牛 于 2013-12-7 15:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  请问WB过程中会不会由于抗体浓度太高，导致蛋白差异显示不出来的情况？！

  会存在这种情况
  上样量也会有影响

• 蓝蜗牛 (2013-12-07 15:54:02)

  谢谢，请问我该如何优化一抗，二抗，以及抗原上样量呢。

• kswl870 (2013-12-07 15:54:40)

  
  有没有做的WB图啊？

• finger (2013-12-07 15:55:01)

  可以根据所购买的抗体说明书所推荐的稀释浓度来进行，抗原可以做梯度实验再做选择。

• 蓝蜗牛 (2013-12-07 15:55:26)

  
  再请问各位，如果二抗倍比稀释后直接点样，然后ECL显色，是选择浓度比较低但亮度最亮的呢？还是选择勉强可见的那个浓度呢？

• Ao7 (2013-12-07 15:55:55)

  调节蛋白的上样量是最好的调节方式，一抗和二抗的浓度不建议随时更改。
  
  如果你是为了分析各组之间的差异，当然是差异越明显的图越好，WB忌讳曝光很深、背景脏、条带粗。

• ending (2013-12-07 15:57:15)

  
  抗体相对抗原来说都必须是过量的，这样得出的抗原抗体反应信号才能反映出抗原量的多寡。不过如果信号太强的话，用肉眼确实不能直观的分辨蛋白量的多少，可以适当稀释抗体或减少曝光时间，或采用多层胶片曝光，再选择信号较弱的那一张。